蛋白质相互作用 - 工业经济论坛.pdfVIP

中国医药生物技术 2010 年 6 月第 5 卷第 3 期 Chin Med Biotechnol, June 2010, Vol. 5, No. 3 211 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.03.010 ·综述· 利用噬菌体展示技术研究功能基因组 和蛋白质-蛋白质相互作用 ——与酵母双杂交方法比较 张佳娣，石屹峰 近年来基因组测序工作已揭示了数以万计的新基因，但 质，即 GAL4 由两个结构上可以分开、功能上相互独立的 是这些基因序列的价值只有当这些数据被翻译成蛋白质功 结构域（domain ）构成，其中有 DNA 结合功能域（DNA 能的时候才能被了解。而蛋白质与蛋白质之间相互作用构成 binding domain ，DNA-BD ）和转录激活结构域（activation 了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，不仅可以从分子 domain，AD ）。这两个结合域将它们分开时仍分别具有功能， 水平揭示蛋白质的功能，而且为我们更好地理解生命过程﹑ 但不能激活转录，只有当被分开的两者通过适当的途径在空 疾病机制和新药开发等提供了一个很好的基础。当前随着人 间上较为接近时，才能重新呈现完整的 GAL4 转录因子活 类基因组和众多生物物种全基因组测序的完成，功能基因组 性，并可激活上游激活序列（upstream activating sequence ， 学（functional genomics ）成为研究的主流，它是对基因组 UAS ）的启动子，使下游基因得到转录。当我们将已知蛋白 中包含的全部基因及其所翻译的蛋白质的功能加以解读和 作为诱饵（Bait ），从 cDNA 基因文库中筛选与诱饵蛋白相 描述，尤其是大量未知基因的功能及其对应的蛋白质产物的 互作用的蛋白质时，将编码已知蛋白（诱饵蛋白）的基因与 功能。在研究功能基因组方面已有许多生物化学和生物物理 BD 基因融合（BD-Bait ），编码未知蛋白（捕获物，Prey ） 方法，其中噬菌体展示（phage display technology ，PDT ） 的基因与 AD 基因融合（AD-Prey ），如果 BD-Bait 和 和酵母双杂交（yeast two-hybrid system ，Y2H ）是比较成熟 AD-Prey 共表达于宿主细胞中能发生相互作用，会使 AD 的生物技术。噬菌体展示技术诞生于 1985 年，在抗体库展 与 BD 形成一个完整的转录激活因子，并激活相应的报告 示方面取得了巨大的成功，也被用于研究蛋白质-蛋白质相 基因表达。通过对报告基因表型的测定，可以很容易地知道 互作用和未知基因克隆等多个分子生物学领域[1] 。酵母双杂 待测蛋白 Prey 是否与已知蛋白 Bait 发生了相互作用。如 交方法诞生于 1989 年，它被广泛用于研究功能基因组和蛋 果将 Prey 换成基因文库，即可直接从基因文库中筛选到能 白质-蛋白质相互作用，但是噬菌体展示技术在研究蛋白质- 与 Bait 相互作用蛋白的 DNA 序列。因此，酵母双杂交技 蛋白质相互作用方面具有一些独特的优势[2] 。本文综述了噬 术也成为研究未知基因与已知基因之间功能相关的主要方 [4] 菌体展示技术在克隆功能基因和研究蛋白质-蛋白质相互作 法 。 用方面的最新进展，同时将噬菌体展示技术与酵母双杂交方 噬菌体展示技术与酵母双杂交技术应用于功能基因筛 法进行了比较。 选和蛋白质-蛋白质相互作用研究时分别具有各自的特点： ①序列多样性：噬菌体展示技术与酵母双杂交技术相比展示 1 噬菌体展示技术与酵母双杂交方法的比较 的序列多样性更大，噬菌体展示技术能在 109 个克隆中筛