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使用目的 SepMate™试管用于通过密度梯度离心从人外周全血和脐带血样本中分离单个核细（MNCs ）。 产品描述 具有内置插件的聚丙烯试管。经伽马射线照射。 储存 室温（15 - 25°C ）下存放。 使用说明 确保样本、含2% 胎牛血清（FBS ）的PBS 缓冲液（PBS+2% FBS ；产品号 #07905 ）、密度梯 度离心液（见“提示”部分）以及离心机均处于室温（15-25°C ）。 1. 使用移液器将密度梯度离心液通过SepMate™插件中央小孔小心加入SepMate™试管中。加 入体积请参考表1。密度梯度离心液上端应淹没过插件。 注意：密度梯度离心液在使用移液器后可能会产生小气泡，这不会对使用效果产生影响。 2. 使用等体积的PBS+2% FBS 稀释样本。轻柔混匀。例如：使用 5 mL PBS+2% FBS 稀释5 mL 样本。 3. 保持SepMate™试管垂直，用移液器沿试管壁加入稀释后的样本。样本将会在插件上面与密 度梯度离心液混合。 注意：样本可以沿管壁直接倒入。注意不要将稀释的样本直接倒在中央小孔上。 4. 在室温下1200xg （见“提示”部分）离心10 分钟，无需关闭离心机刹车。 注意：对于存放超过24 小时的样本，推荐离心时间为20 分钟。 5. 倒出上层液体至一个新的试管，该层含富集的MNCs 。请勿将SepMate™试管在倒置状态下 超过2 秒。 北京诺为生物技术有限公司 电话：010 E-mail: nwbiotec@ 地址：北京市海淀区上地信息路15 号608 1 注意：离心后可能会有部分红细胞（RBCs ）出现在SepMate™插件的表层，但不会对使用效 果产生影响。 6. 使用PBS + 2% FBS 清洗MNCs 。重复清洗一次。 注意：清洗细胞时建议在室温下300xg 离心8 分钟，无需关闭离心机刹车。 SEPMATE™流程 括号中的数字对应“使用说明”部分的步骤。 提示 样本 SepMate™可用于人外周全血和脐带血样本。存放超过48 小时的样本未被测试过。欲将 SepMate™用于除人外周全血和脐带血样本以外其它的样本， 请发邮件至 techsupport@ ， 与STEMCELL Technologies 公司的技术支持部门联系。 SepMate™-15 SepMate™-15 用于处理0.5-5 mL 的起始样本。 北京诺为生物技术有限公司 电话：010 E-mail: nwbiotec@ 地址：北京市海淀区上地信息路15 号608 2 红细胞压积至少需要 0.25 mL 。因此对于红细胞比容较低的病人血液样本，最小样本体积可能 会超过0.5 mL。 红细胞压积的最大体积为3 mL。因此对于红细胞比容较高的病人血液样本，最大样本体积可 能会少于5 mL。 SepMate™-50 SepMate™-50 用于处理4-17 mL 的起始样本。 红细胞压积至少需要2 mL 。因此对于红细胞比容较低的病人血液样本，最小样本体积可能会 超过4 mL 。 红细胞压积的最大体积为12 mL。因此对于红细胞比容较高的病人血液样本，最大样本体积可 能会少于17 mL。 密度梯度离心液 密度梯度离心液是指Lymphoprep™ （货号 #07801 ）、Ficoll-Paque™ PLUS ，或其它类似的密 度梯度离心液。 推荐缓冲液 推荐使用含有2% FBS 的PBS 缓冲液（PBS+2% FBS ，货号#07905 ）。 g 与 RPM 的换算 将 g 换算为rpm ，使用以下公式： 其中： RPM =离心机的转速，以每分钟转数计算 RCF = 相对离心力（g ） Radius = 离心机转子的半径，用厘米（cm ）表示 故障排除 如果离心后插件上的密度梯度离心液出现红色（即部分红细胞没有沉降），可以将SepMate™试 管再以1200xg 离心10 分钟，无需关闭离心机刹车。这种情况可能发生于存放超过24 小时 的样本。 血小板的去除