利用犈犕犃 狇犘犆犚建立快速检测猕猴桃溃疡病菌活菌的 - 植物保护.pdf

　 犘犾犪狀狋犘狉狅狋犲犮狋犻狅狀 实 验 方 法 与 技 术 犈狓犲狉犻犿犲狀狋犪犾犕犲狋犺狅犱牔犜犲犮犺狀狅犾狅 狆 犵狔 利用犈犕犃犘犆犚建立快速检测猕猴桃 狇 溃疡病菌活菌的方法 ， １２ ２ ２ ３ 周大祥 ， 殷幼平 ， 王中康 ， 熊 书 　 　 　 　 （ 重庆三峡学院生命科学与工程学院，万州 ； 重庆大学生命科学学院，重庆市基因功能与 １． ４０４１００ ２． 　 调控重点实验室，重庆 ； 重庆三峡医药高等专科学校基础医学部，万州 ） ４０００３０ ３． ４０４１２０ 　 　 摘要 利用叠氮溴乙锭（ ， ）与实时荧光定量 技术相结合（ ），建立 ｅｔｈｉｄｉｕｍｍｏｎｏａｚｉｄｅｂｒｏｍｉｄｅＥＭＡ ＰＣＲ ＥＭＡＰＣＲ 　 ｑ 了一种有效快速检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法。以猕猴桃溃疡病菌ＩＴＳ序列为检测靶标，菌体经ＥＭＡ渗透处 理，再进行 特异性扩增。结果显示， 检测灵敏度为 ；当 的浓度为 ／ 时，能有效抑制 ＰＣＲ ＰＣＲ ２ｃｆｕ ＥＭＡ ２．０ ｍＬ ｑ ｑ μｇ ７ ／ 经高温灭活的死菌的扩增，对活菌的扩增没有影响。当活菌数在 １ ５ 范围 １．０×１０ｃｆｕｍＬ １．０×１０ １．０×１０ｃｆｕ ～ 内，每个 反应体系中活菌数与 值呈线性相关（２ ）。不同温度处理活菌菌悬液后用 检 ＰＣＲ 犆狋 犚＝０．９８８ ＥＭＡＰＣＲ ｑ ｑ 测猕猴桃溃疡病菌的存活情况并与平板计数法进行比较，结果表明待检样品可在 和 短期保存。对疑似带 ４℃ ２０℃ 病猕猴桃材料进行ＥＭＡＰＣＲ检测，结果表明能减少猕猴桃溃疡病菌ＰＣＲ的假阳性结果。本研究建立的ＥＭＡ ｑ ＰＣＲ方法是一种有效检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法，能有效避免ＰＣＲ检测实际样品可能造成的假阳性