去甲基万古霉素菌种低温冷冻、冷干保藏条件优化及10 年菌种保藏效果.pdf

微生物学通报 Jul. 20, 2016, 43(7): 1627−1634 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160076 生物实验室 去甲基万古霉素菌种低温冷冻、冷干保藏条件优化及 10 年菌种保藏效果 王耀耀 朱研研 郝惠云 付美红 王亚莉 张雪霞* (微生物药物国家工程研究中心 河北省工业微生物代谢工程技术研究中心 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 河北 石家庄 050015) 摘 要：【目的】针对去甲基万古霉素产生菌不耐保藏的问题，改进菌种保藏方法，对超低温液 氮保藏、−80 °C 低温冷冻保藏、冷干保藏方法跟踪考察 10 年保藏稳定性，评价不同保藏方法 对去甲基万古霉素产生菌的保藏适用性。【方法】采用甘油作基础保护剂进行超低温液氮保藏 和−80 °C 低温冷冻保藏，采用脱脂牛奶作基础保护剂进行冷干保藏，针对超低温液氮保藏进行 降温速率考察，研究非渗透性冷冻保护剂海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等对 3 种保藏方法的冻 存影响，对优选出的保藏方法进行 10 年跟踪考察。【结果】3 种保藏方法冻后菌种存活率依次 为：−80 °C 低温冷冻保藏超低温液氮保藏冷干保藏。液氮保藏最适降温速率为快速冷冻。优 选出最佳保护剂配方：超低温液氮保藏为甘油 8.0 %，海藻糖3.5 %；−80 °C 低温冷冻保藏为甘油 6.0 % ，PVP 5.0%；冷干保藏为脱脂牛奶，6.0 %海藻糖。采用优化保藏条件，液氮保藏 10 年存 活率稳定在 70.6 % ，菌种发酵水平为入藏水平的92.9 %。【结论】在优化条件下，尤以超低温液 氮保藏适合于去甲基万古霉素产生菌长期保藏。 关键词：去甲基万古霉素产生菌，超低温液氮保藏，−80 °C 低温冷冻保藏，冷干保藏，海藻糖， 聚乙烯吡咯烷酮 Foundation item: National Science and Technology Program for “Major New Drug Innovation and Development” (No. 2014Z004) *Corresponding author: Tel: 86-311 E-mail: zhangxuexiazxx@163.com Received: January 21, 2016; Accepted: April 15, 2016; Published online (): April 27, 2016 基金项目：国家“重大新药创制”科技专项(No. 2014Z004) *通讯作者：Tel ：86-311；E-mail ：zhangxuexiazxx@163.com 收稿日期：2016-01-21 ；接受日期：2016-04-15 ；优先数字出版日期() ：2016-04-27 1628 微生物学通报 Microbiol. China 2016, Vol.43, No.7 Optimization of cryopreservation and lyophilization for demethylvancomycin producing strain—an assessment of 10-year preservation WANG Yao-Yao ZHU Yan-Yan HAO Hui-Yun FU Mei-Hong