双光子荧光有机纳米粒子的细胞染色.pdf

V01．31 高 等 学 校 化 学 学报 No．4 2010年 4月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 632～634 [研究快报] 双光子荧光有机纳米粒子的细胞染色 徐 红 ，杨淑敏 ，陈 更 ，田雷蕾 ，何 凤 ，王广义 ，马於光 (1．吉林大学第一医院，长春 130021；2．吉林大学超分子结构与材料国家重点实验室，长春 130012) 关键词 双光子荧光；有机纳米粒子；细胞染色 中图分类号 O631；Q24 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2010)04-0632-03 相比于传统的单光子荧光显微镜，双光子荧光显微镜由于其具备近红外光激发、允许活体组织成 像、降低光损伤和光漂白、深度组织穿透力、暗场成像及高分辨率等优点，被认为是生物成像技术发 展中的里程碑 ]．因此，开发与之匹配的较大双光子吸收截面的有机双光子荧光探针进行细胞成像 研究，成为 目前广泛关注的热点 ．目前具有双光子性能的有机分子荧光探针已被成功应用于细胞 标记 曲]．但是由于荧光分子在细胞 内的聚集浓度较低，而且其生物环境复杂，容易对荧光探针分子 造成猝灭，不利于生物过程中实时监测的高灵敏度的荧光成像．因此，迫切需要发展一种染料填充密 度高、光稳定性好及高灵敏度的荧光标记物 ¨．纳米粒子可以将染料集中聚集于纳米体积内¨，因 此经纳米粒子标记的靶向细胞或者组织的单位体积内的染料密度远远大于其分子标记时的染料密度， 有利于高灵敏度和高质量的荧光成像 ．基于此，本文采用具有较大双光子吸收截面的有机分子2， 5，2，5一(4 N，Ⅳ．二苯胺苯 乙烯基)联苯 (DPA．TSB)(双光子吸收截面 ：3288GM，1GM=1×10 ” cm ·s·photon～ ·molecule )¨ ，通过再沉淀法制备水相分散的纳米粒子-】．研究表 明，这种有机 双光子纳米粒子可以有效地富集在细胞质中，对细胞染色显示出良好的荧光成像能力． 1 实验部分 1．1 仪器与材料 UV-3100型紫外分光光度计 ；RF-5301PC型荧光分光光度计 ；PESAJEOLJSM一 6700F场发射扫描电镜；ZetasizerNanoZS(MalvernInstruments)动态光散射及 电势测量仪；光谱物理公 司飞秒再生放大系统；倒置共聚焦显微镜 (FV1100，OLYMPUS)． 人宫颈癌细胞 (HeLa)由吉林大学基础医学院提供；RPMI1640培养液等均购于北京鼎国生物技术 有限公司． 1．2 双光子纳米粒子的制备 DPA—TSB材料按照文献 [13]方法合成．取 2mLDPA．TSB的THF溶液 (0．1mg／mL)，快速注入 8mL高纯水中，搅拌，透析除去THF，得到纳米粒子水相分散液． 1．3 细胞培养及染色 用 RPMI1640培养基培养 HeLa细胞．用无菌 DPA—TSB纳米粒子 (最终浓度 20p,g／mL)染色，以质量分数为4％的多聚甲醛溶液将细胞固定，进行碘化丙啶(PI)复染，在激光共聚 焦荧光显微镜下观察． 2 结果与讨论 2．1 双光子纳米粒子的制备 通过再沉淀法制备得到的DPA．TSB纳米粒子的扫描 电镜照片如 图1(A)所示．可以看出，粒子为球状，尺寸 比较均一，直径大约为65nm．DPA．TSB纳米粒子水相分 散液澄清透明，放置6个月以上，仍无可见沉淀，且粒子形貌及光学性质均无明显变化，说明纳米粒 子的稳定性较强．图1(B)为DPA—TSB纳米粒子水溶液在800nm激光激发下得到的双光子荧光照片． 可以看出，纳米粒子发出清晰可见的绿色荧光，表明DPA—TSB纳米粒子具有双光子吸收性质． 收稿 日期：2009—10-04． 基金项 目：国家 自然科学基金(批准号资助． 联系人简介：徐 红，女，教授，主要从事消化道肿瘤的临床及基础研究．E-mail：chxuhong@163．com 王广义，男，博士，教授，博士生导师，主要从事消化道肿瘤临床研究．E—mail：wgymd@sina．com 徐 红等 ：双光子荧光有机纳米粒子的细胞染色 633 Fig．1 S