太湖水华藻的分离、鉴定和产毒特性 - 东南大学学报.pdf

第４０卷第６期 东南大学学报（自然科 学版 ） Ｖｏｌ．４０ Ｎｏ．６ 　 ２０１０年１１月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＳＯＵＴＨＥＡＳＴＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ） 　 Ｎｏｖ．２０１０ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－０５０５．２０１０．０６．０３９ 太湖水华藻的分离、鉴定和产毒特性 李小琴　杨　飞　尹立红　梁戈玉　李云晖　浦跃朴 （东南大学环境医学工程教育部重点实验室，南京２１０００９） 摘要：采用抗生素与倍比稀释相结合的分离方法，对太湖梅梁湾水域水华的优势藻进行分离培 养；结合全细胞聚合酶链反应（ＰＣＲ）、高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）和实时荧光定量ＰＣＲ（ＲＴＱ ＰＣＲ）法进行藻属与产毒特性分析．结果显示：自太湖梅梁湾水域成功分离获得２株藻株ＴＨ１和 ＴＨ２，２株藻株藻蓝蛋白基因中间序列（ＰＣＩＧＳ）、微囊藻１６ＳｒＤＮＡ保守序列（Ｍｉｃｒ１６ｓｒＤＮＡ） 扩增均为阳性，ＴＨ１的微囊藻毒素合成酶基因Ｂ（ｍｃｙＢ）扩增为阳性，而ＴＨ２的ｍｃｙＢ扩增为阴 ８ 性．培养１５ｄ的ＴＨ１藻株每１０个藻细胞产生的总微囊藻毒素ＬＲ（ＴＭＣＬＲ）为０．５９４ ｇ，胞外 μ 微囊藻毒素ＬＲ（ＥＭＣＬＲ）为０．０８５ ｇ，分别为铜绿微囊藻产毒株的６１．９３％和８６．０９％；ＴＨ２ μ 藻株未检出ＭＣＬＲ．ＴＨ１藻株ｍｃｙＢ的ｍＲＮＡ相对表达水平为铜绿微囊藻产毒株的５．９％．结 果表明：分离自太湖梅梁湾的２株藻细胞均为蓝藻门中的微囊藻属，其中１株产毒微囊藻具有较 强的产毒能力，太湖梅梁湾水域有产毒微囊藻污染． 关键词：富营养化；藻；全细胞ＰＣＲ；高效液相色谱法；微囊藻毒素；太湖 中图分类号：Ｘ１７１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００１－０５０５（２０１０）０６１３３２０５ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｔｏｘｉｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆａｌｇａｅ ｉｎｂｌｏｏｍｏｆＭｅｉｌｉａｎｇＢａｙｏｆＬａｋｅＴａｉｈｕ ＬｉＸｉａｏｑｉｎ　ＹａｎｇＦｅｉ　ＹｉｎＬｉｈｏｎｇ　ＬｉａｎｇＧｅｙｕ　ＬｉＹｕｎｈｕｉ　ＰｕＹｕｅｐｕ （ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｌｇａｅｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＭｅｉｌｉａｎｇＢａｙｏｆＬａｋｅＴａｉｈｕｂｙｄｉｌｕｔｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｗｅｒｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｂａｃｔｅｒｉａ．Ｔｈｅｇｅｎｕｓａｎｄｔｏｘｉｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆａｌｇａｅｗｅｒｅａｎ ａｌｙｚｅｄｂｙｗｈｏｌｅｃｅｌｌｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ），ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ）ａｎｄｒｅａｌｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ（ＲＴＱＰＣＲ）ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｗｏａｌｇａｅｓｔｒａｉｎｓ ａｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＭｅｉｌｉａｎｇＢａｙｏｆＬａｋｅＴａｉｈｕｂｌｏｏｍｎａｍｅｄａｓＴＨ１ａｎｄＴＨ２．ＴｈｅＰｈｙｃｏ ｃｙａｎｉｎｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｓｐａｃｅｒ（ＰＣＩＧＳ）ｇｅｎｅａｎｄ１６ＳｒｉｂｏｓｏｍａｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｏｆＭｉｃｒｏｃｙｓｔｉｓ（Ｍｉｃｒ １６ＳｒＤＮＡ）ｇｅｎｅａｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｉｎｂｏｔｈａｌｇａｅｓｔｒａｉｎｓａｎｄ