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实验七 酵母细胞大小的测定 一、实验目的： 1. 学会显微镜测微尺的使用和计算方法 2. 掌握酵母菌细胞体积的测定方法 二、实验原理 • 微生物个体微小，必须借助显微镜测微技术才能观察清楚。 因此，必须了解测微尺的构造。显微测微尺由目镜测微尺 和镜台测微尺组成。 1.测微尺的构造和使用方法 • 目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中央有精确的等分刻度， 测量时将其放在目镜中的隔板（位于接目镜和会聚透镜之 间）上。由于不同显微镜的放大倍数不同，故目镜测微尺 每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而 改变，因此，在使用前必须用镜台测微尺进行标定。 • 镜台测微尺为一块中央有精确等分线的载玻片，一般将长 为1mm的直线等分成100小格，每格长为0.01mm，即10 μ m 。 2. 目镜测微尺的标定 (1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微尺放 人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上 目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度的一 面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆圈位于 视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺的刻 度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺 的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相重合，再 向右寻找两尺的另外一条重合线。 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺 的格数。 3.计算方式 (1) 目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数 ×10 ／两个重叠刻度间目镜测微尺格数 (2) 以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每 格的实际长度。 目镜测微尺( )格=物镜测微尺( )格 目镜测微尺每格=( ) (3)如此测定后的目镜测微尺的尺度，仅适用于测定时所用 的显微镜的目镜和物镜的放大倍数。若更换物镜、目镜的 放大倍数时，必须再进行校正标定。 三、实验材料 1．菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ） 2 ．培养基：麦芽汁液体培养基。 3 ．工具：显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，载玻片， 盖玻片，酒精灯，无菌吸管，滤纸条等。 四、实验内容： 1. 目镜测微尺的标定： 计算40倍物镜下目镜测微尺每格长度 目镜测微尺每格长度( μm) =两条重合线间目镜测微尺 的格数两条重合线间镜台测微尺的格数×10 2. 酿酒酵母大小的测定 (1) 取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸片。 (2) 测量菌体的长轴和短轴各占目镜测微尺的格数（可不 断转动目镜测微尺和移动载物台上的标本），然后换 算出菌体的实际长度。 (3) 在同一标本上测量5~10个酵母细胞，取其平均值。 3. 酵母菌体积的测定 用显微测微尺测量并换算出酵母菌细胞的长轴（用a表 示）和短轴（用b表示）的实际长度 按下列公式即可求出酵母菌细胞的体积V ： 五、实验结果： (1) 接目镜倍数是 ；物镜倍数 。 (2) 40倍物镜下，接目镜测微尺 格=物镜测微尺 格。 目镜测微尺每格= μm 。 (3) 在麦芽汁培养基中，28 ℃培养48小时后， 酵母菌长= 目镜测微尺 格= ( μm) ； 酵母菌宽= 目镜测微尺 格= ( μm) ； 3 酵母菌细胞体积= ( μm ) 。 六、思考题 若更换不同放大倍数的目镜和物镜时，必须用物镜测 微尺重新标定目镜测微尺，这是为什么?