索拉菲尼对EGFR及K-ras基因突变肺癌细胞株的增殖抑制作用及其作用机制论文.pdfVIP

· 220 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2013Mar；48(3) 索拉菲尼对 EGFR及K．ras基因突变 肺癌细胞株的增殖抑制作用及其作用机制 李 静 ，潘跃银 ，张 颖 摘要 目的 探讨索拉菲尼对非小细胞肺癌 PC9细胞株 受体(vascularendothelialgrowthfactorreceptor，VEG— (EGFR基因突变)及A549细胞株 (K—ras基因突变)的抑制 FR)、血小板衍生生长因子受体 (platelet—derived 作用，并探讨其作用机制。方法 噻唑蓝(MTT)法检测索拉 growthfactorreceptor，PDGFR)，从而抑制肿瘤血管 菲尼分别对PC9及A549细胞的增殖抑制作用。流式细胞 生成和转移。该研究旨在初步探讨索拉菲尼对EG— 仪检测对细胞周期的影响。Westernblot法检测 p-ERK及 FR基因突变及 K—ras基因突变的肺癌细胞株的增 ERK表达水平的影响。结果 在 0．78～25txmol／L浓度范 殖抑制作用及其机制，为t1~4,细胞肺癌的I床治疗 围内，索拉菲尼明显抑制PC9及 A549细胞的增殖，且具有 提供实验依据。 时间和浓度的依赖性。流式细胞仪细胞周期分析结果显示， 索拉菲尼将PC9和A549细胞阻滞于G1期。Westernblot结 1 材料与方法 果显示，索拉菲尼能够下调 A549细胞 p-ERK的表达水平。 结论 索拉菲尼能抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制 1．1 实验材料 人非小细胞肺癌A549(K—ras基因 剂 (EGFR—TKIs)敏感及耐药肺癌细胞株 PC9及 A549的生 突变)、PC9(EGFR基因突变)细胞株由广东省医学 长，推测索拉菲尼抗增殖机制可能与对细胞周期的影响以及 科学院(广东省肺癌研究所)提供；索拉菲尼由德国 抑制 Ras-Raf-MEK-ERK生存通路有关。 拜耳公司赠送；胎牛血清和 RPMI1640购 自美 国 关键词 索拉菲尼；肺癌；细胞周期 ；蛋白质印迹 HyClone公司；噻唑蓝(MTY)、二甲基亚砜(DMSO)、 中图分类号 R734．2；R329．25；R979．19 PT染液购 自美国Sigma公司；B．actin、ERK、p-ERK 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2013)03—0220—04 抗体购 自美国CellSignalTechnology公司。 1．2 方法 肺癌是 目前致死率最高的恶性肿瘤之一，其中 非小细胞肺癌约 占80％_1-2]。药物治疗是晚期非 1．2．1 细胞培养 A549、PC9细胞用含 10％胎牛 血清的RPMI1640培养液 (内含青霉素 100U／ml、 小细胞肺癌治疗的重要手段之一，但总的治疗效果 链霉素 100 g／m1)培养，置于含 5％ CO，、37℃恒 并不令人满意。目前，靶向抗癌药物被批准作为肺 温培养箱中。每 1～2d传代 1次，取对数生长期细 癌的二线治疗 ，包括表皮生长因子受体酪氨酸激 胞进行实验。 酶抑制剂 (epid