红芪多糖的提取分离纯化及组成分析论文.pdfVIP

一82一 甘肃省化学会第二十五届年会论文集 红芪多糖的提取分离纯化及组成分析 封士兰‘，马 丹，刘小花，李冰，李晓东，胡芳弟 (兰州大学药学院，甘肃兰州 730000) 摘要：目的：获得红芪多糖纯品并且得到其单糖组成。方法：通过分步醇沉法和凝胶柱层析获得 G-200纯化后分别得到 红芪多糖纯品，用气相色谱法测其组成。结果：红芪多糖1和2经Sephadex G一25得到两个组分；红芪多糖1、2、3均由鼠李糖、阿拉伯 两个组分，红芪多糖3通过Sephadex G．200 糖、木糖、葡萄糖、半乳糖五种单糖组成。结论：分步醇沉法获得的三种多糖1、2、3经Sephadex G一25纯化可获得红芪多糖纯品，GC法测其组成方法简便可行。 和Sephadex 关键词：红芪多糖；纯化；单糖组成；凝胶色谱 Hand．一Mazz)的根．为甘肃特产名贵 红芪系豆科岩黄芪属植物多序岩黄芪(Hedysarumpolybotrys 药材，中医作为补气药，并有强心、利尿、降压、护肝及抗肾炎等作用，其主要活性成分红芪多糖 fHPS)tl提高超氧化物歧化酶(SOD)活性，从而起到增强免疫力、抗衰老、增强淋巴因子活化杀伤细 胞(LAK)对肿瘤细胞的杀伤和多种生物效应II’2J。目前对红芪多糖的研究主要是药效学研究和复方 中提取多糖的工艺研究【3】，并有对红芪多糖中一均多糖的分离纯化和结构研究的报道【4】。本文从甘肃 武都红芪药材中提取多糖，建立其纯化方法，测定组成，为红芪多糖药物的开发应用提供理论基础。 1主要仪器与试剂 1．1仪器 UV．9100紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器厂)、离心机(上海安亭科学仪器厂)、FD．1 KQ3200DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。 1．2试剂 无水乙醇，苯酚，硫酸，氯仿，三氟醋酸，盐酸羟胺，吡啶，醋酐，鼠李糖、木糖、葡萄糖、 G一25(上海 半乳糖、阿拉伯糖对照品(购自中国药品生物制品检定所)，SephadexG．200，Sephadex 长征制药厂)。试剂均为国产分析纯，水为双蒸水。红芪药材购自甘肃武都。 2方法 2．1红芪多糖的提取分离 取红芪干燥根，粉碎，加乙醇，回流2小时。药渣干燥后加水煎煮三次(2h、1．5h、lh)，合 并煎煮液并浓缩。冷却后加入乙醇使乙醇浓度为30％，静置4 淀，为粗多糖I；上清液加乙醇使浓度为50％，静置离心后得沉淀，为粗多糖II；上清液再加乙醇 使浓度为70％，静置离心得沉淀，为粗多糖IⅡ，将所得多糖冷冻干燥。多糖I、II、IⅡ分别溶于蒸 馏水中，加热溶解之后，冷却，分别加入胃蛋白酶，37℃酶解，离心，弃去沉淀，上清液Sevage法 除蛋白质，然后用双氧水脱色，再分别加乙醇，使乙醇浓度分别为30％，50％，70％，静置，离心， 分别得红芪多糖半粗品1、2、3，冷冻干燥。取部分70％红芪多糖，即多糖3溶于蒸馏水，加入乙 醇使含醇70％，静置离心后得沉淀，为多糖31；上清液蒸干，得结晶状样品为32。 2．2红芪多糖的凝胶色谱分析 mmx380 G一200(20 mm) 取红芪多糖l、2分别溶于蒸馏水中，离心除去不溶物，上清液上Sephadex 分离，用0．9％NaCl溶液洗脱，洗脱速度0．2mL／min，每3mL收集一份，苯酚一硫酸法跟踪检测， G一200处理方法，用于 绘制吸收曲线，收集主峰部分，透析后冷冻干燥。SephadexG．25同Sephadex 分离红芪多糖3和31。在洗脱多糖3时，洗脱