体外转录法制备小反刍兽疫病毒荧光定量RT—PCR检测标准阳性模板.pdfVIP

中国动物检疫 2008年第 25卷第 12期 @ 嘲 一28一 体外转录法制备小反刍兽疫病毒 荧光定量 RT—PCR检测标准阳性模板 赵文姬 1l2，包静月 ’，李林 ’，王志亮 (1．中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心，山东青岛 266032； 2．扬州大学兽医学院，江苏扬9I,I‘225009) 摘 要：针对小反刍兽疫病毒的F基 因设计 了一对荧光定量RT—PCR 的引物和探针．在正向引物的5端加上 T7启动子后与反向引物扩增小反刍兽疫病毒株Nigeria75／1细胞培养液RNA．切胶回收 目的条带作为体外转录 模板．体外转录后测 RNA浓度 以及 OD值 。线性试验和特异性试验结果表 明，该模板具有 良好的线性范围和特异 性。当稀释度为 4．9x108~4．9x103拷贝／L时，相关系数为0．999。该模板稳定性好 。一80cIC保存一个月后无显著变化 对起始浓度为4．9×10、4．9×10s、4．9×10拷贝／Ixl的标准品分别