聚合物基质弱阳离子交换整体柱的制备及其色谱性能研究.PDF

第十一届全国离子色谱学术报告会论文集 浙江杭州.2006.11.28-30 2 聚合物基质弱阳离子交换整体柱的制备及其色谱性能研究 丁明玉，彭虹，郑睿 （清华大学化学系，北京，100084） 摘要：在0.32mm的弹性石英毛细管内，制备了聚合物基质的毛细管整体柱。优化了试剂配比、反应时间等 合成条件，制备出了大孔径且孔径均一的甲基丙烯酸缩水甘油酯整体柱。用亚胺基乙二酸对整体柱进行改 性，得到了弱酸型阳离子交换整体柱。考察了改性时间、改性温度和pH值与离子容量的关系，并将该整体 柱用于蛋白质的分离。 关键词：离子色谱，毛细管整体柱，甲基丙烯酸，弱阳离子交换 毛细管整体柱微柱液相色谱在生物物质分离以及与质谱等仪器的联用上显示出了优越 的性能，因而成为近年色谱的一个热点研究领域。目前有关离子色谱整体柱的报道大多是在 常规尺寸（4.6mm ID ）的商品无机硅胶整体柱上进行修饰，用于无机阴、阳离子的分离分 析。用于离子性成分分离的毛细管离子色谱整体柱的研究还很少。Yuji等[1]报道在 250μm 内 径毛细管内原位聚合有机整体柱，分离了一价和二价阳离子。Haddad等[2]在 250μm石英毛细 管柱内制备聚合物整体基质后，在其表面涂敷季铵功能化乳胶颗粒，30s 内分离了无机离子 和有机酸。以往报道的弱阳离子交换整体柱通常采用两步法改性，即先用乙二胺处理，再和 氯乙酸反应。我们利用亚胺基乙二酸进行一步改性，简化了合成步骤。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 加厚 0.32mm ID（0.69mm OD）弹性石英毛细管柱(河北省永年锐丰色谱器件有限公 司),KYKY 2800 扫描电镜(中国科学院北京科学仪器研制中心),AutoPore IV 9510 汞渗透测 孔仪(美国 Micromeritics Inc.)。 甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA，东京化成工业株式会社），乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA， Acros Organics，USA），γ-甲基丙烯酸氧丙基三甲氧基硅烷（γ-MAPS，东京化成工业株式 会社）；正丙醇和 1，4-丁二醇（北京市化学试剂三厂）；偶氮二异丁腈（AIBN，天津福辰化 学试剂厂），使用前重结晶出去杂质；实验用水为二次蒸馏水。 1.2 毛细管壁预处理 对石英毛细管壁做预处理，主要是引入双官能团试剂 γ- 甲基丙烯酸氧丙基三甲氧基硅烷 （γ-MAPS ）。γ-MAPS 的一端含有烷氧基团，与石英毛细管壁的硅羟基反应，另一端含有双 键，在下一步单体聚合时参与聚合反应。毛细管壁预处理的具体步骤如下：利用水泵的负压 将 0.1mol/L 的氢氧化钠、水、丙酮依次通过毛细管；通入氮气，吹干毛细管；将 30%的 γ- 甲基丙烯酸氧丙基三甲氧基硅烷/丙酮溶液充满处理后的毛细管，密封过夜；用丙酮冲洗毛 细管，氮气吹干，备用。 1.3 聚合物整体固定相的制备 将单体甲基丙烯酸缩水甘油酯（0.90mL ）、交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯(0.30mL)和三 元致孔剂（正丙醇 1.05mL、1，4-丁二醇 0.60mL、水 0.15mL ）溶液混合后，加入 12mgAIBN， 超声震荡 5min，使其充分溶解，然后通氮气除氧 3min 。溶解后，立即将反应混合溶液注入 经双官能团试剂处理过的毛细管中，并用硅橡胶将两端密封，放入 60ºC 恒温水浴中连续加 热 24 小时，通过热引发在柱管中原位聚合得到聚甲基丙烯酸缩水甘油酯整体柱。反应完成 后，将整体柱连接在高压液相色谱泵上，用乙醇和水冲洗毛细管，去除致孔剂、未反应单体 及其它可溶性化合物。 第十一届全国离子色谱学术报告会论文集 浙江杭州.2006.11.28-30 3 配制 50mL 2mol/L的Na CO 缓冲液，加入 5g亚胺基乙二酸和 2g NaCl ，超声震荡使其充 2 3 分溶解，然后用NaOH调节pH至 11。利用水泵负压将该溶液以 10μL/min流速循环流过甲基 丙烯酸缩水甘油酯整体柱，保持 70℃恒温反应 12 h。反应完成后，用水冲洗毛细管，再用 0.1mol/L 的NaOH溶液以 0