芒果苷对糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用.docVIP

　　芒果苷对糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用 糖尿病性心肌病(diabetic cardiomyopathy，DCM) 是由于糖尿病状态下糖、脂代谢紊乱导致心肌、血管内皮等组织的代谢紊乱，引起心肌肥大、变性、增厚、间质纤维化，也是导致糖尿病患者死亡的主要原因之一[1]。近年来越来越多的学者发现，心肌间质纤维化在DCM的发生和发展中起着不容忽视的作用。因此，如何预防和治疗糖尿病心肌纤维化已成为目前国际上研究的热点之一。 AP-1是一种致纤维化因子，在心脏疾病中的作用已逐渐受到人们的关注。它是由原癌基因jun和fos分别编码的JUN和FOS蛋白嵌合而成的二聚体复合物，能结合于DNA上诱导细胞增殖或细胞凋亡[2]。它参与了许多生长因子和细胞因子的基因转录调控，导致机体一系列的生理和病理变化[3]。AP-1也是MAPK信号通路的主要作用底物，MAPK家族中的ERKs、JNKs和p38MAPKs通过不同的底物磷酸化，在基因水平和蛋白水平对AP-1活性进行调控[4-5]。活化的AP-1能与DNA调节序列相结合，可被基因启动子或增强子序列识别并结合，从而启动相应的基因转录。与AP-1结合的DNA序列包括TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白B及纤溶酶原激活抑制物（PAI-1）等基因的启动子，这些基因的表达均受AP-1调控[6-8]。Aragno[9]等研究发现，高血糖可导致AGEs增加，AGEs和AGE受体结合后诱发氧化应激反应，产生大量氧自由基，激活AP-1,进而上调TGF-βl。 转化生长因子（transforming groatrix，ECM）分泌等方面有重要调节作用。TGF-β能在心肌细胞表达，并与心肌纤维化有关[10]。高血糖可通过激活蛋白激酶C（PKC）途径直接刺激TGF-β的表达，进而促进成纤维细胞增生、肥大及胶原合成增加。TGF -β在糖尿病心肌病中，由活化型的TGF-β受体介导，并能在ECM和基底膜处与蛋白质结合而发挥局部生物学作用，其主要作用使成纤维细胞合成胶原纤维、纤维连接蛋白、蛋白多糖增加，促使组织纤维化[11]。 纤维连接蛋白（FN）又称纤连蛋白，分子量440KD。它主要由肝细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、纤维母细胞合成、分泌，能趋化纤维母细胞、内皮细胞、上皮细胞参与组织增生、修复、纤维化。纤维连接蛋白（FN）基因启动子亦有AP-1结合位点[12],AP-1的活化可直接促进FN的表达。 芒果苷(mangiferin)，又名芒果素，知母宁，是从百合科植物知母中提取的天然多酚类化合物。众多研究表明，芒果苷具有抗氧化[13]、抗病毒、调节凋亡、抗肿瘤、抗糖尿病[14]、抗炎症等作用。Girón等研究也表明：芒果苷可抑制α-糖苷酶活性，使葡萄糖在肌肉和脂肪细胞中的转换增加更多的进入组织，降低血糖[15]，同时对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用良好，使得葡萄糖基无法水解进入血液成为游离葡萄糖。本实验建立糖尿病大鼠模型，观察芒果苷对糖尿病大鼠心脏的保护作用以及对AP-1、 TGF-β1、FN表达的影响，进而探究芒果苷治疗糖尿病心肌病的机制，为临床干预糖尿病心肌病提供新的依据。 糖尿病心肌病(DCM)是指糖尿病时心脏微血管病变和心肌代谢紊乱引起的心肌广泛灶性坏死，可诱发心力衰竭、心律失常、心源性休克和猝死。临床早期主要表现为舒张功能不全，晚期也合并收缩功能障碍。 1.糖尿病心肌病大鼠模型 链脲佐菌素（streptozocin, STZ）是一种从链霉菌属中提取的抗生素，能选择性地作用于胰岛的β细胞，诱导糖尿病的发生[16]。STZ腹腔或尾静脉注射是制备糖尿病大鼠模型的常用方法。本实验尾静脉注射1% STZ 45mg/Κg,72 h后，连续三次随机血糖≥16.7mmol/L为DM模型。饲养12模型组大鼠心肌细胞体积明显增大，大小不均，胞浆丰富，心肌纤维排列紊乱，出现炎性细胞浸润。Masson染色心肌间隙明显增宽，胶原纤维明显增多。 2. AP-1/TGF-β1/FN信号通路与糖尿病心肌病 活化蛋白- 1（activator protein-1, AP-1）被誉为细胞内信号转导的第三信使，启动基因转录的分子开关，其在细胞增殖、分化、凋亡等病理过程中起着枢纽作用。它不仅参与了许多细胞因子的转录、诱导粘附分子的表达和自身免疫应答，还能够激活基因诱导的自身免疫介导的胰岛 β 细胞凋亡[17]。因而 AP-1 介导的转录异常有可能导致 1 型糖尿病的发生[18]。Jun 和 Fos 基因对一系列刺激极为敏感[19]，这些刺激包括[20]：TPA、血清、细胞因子及 T、B 淋巴细胞激活蛋白、神经递质和紫外线照射、电离辐射、DNA 损伤、氧化应激等，受刺激后迅速被活化，Jun 和 Fos蛋白的表达显著增加。糖尿病时糖代谢紊乱，大量的ROS产生。活化的