酵母双杂交系统测定抗雌激素物质1 - 北京大学城市与环境学院.pdf

( ) 北京大学学报 自然科学版 ,第 39 卷 ,第 4 期 ,2003 年 7 月 Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Pekinensis , Vol. 39 , No. 4 (July ,2003) 酵母双杂交系统测定抗雌激素物质1) 2) 胡建英 　谢国红 (北京大学环境学院资源与环境地理系 ,北京 ,100871) 摘 　要 　建立了用酵母双杂交系统筛选具有抗雌激素作用物质的生物测试法 ,并对 6 种工业用酚 ( 类物质 4n壬基酚 , 2sec丁基酚 , 2羟基联苯 , 3叔丁基酚 , 2叔丁基酚和 4乙基2 ,6二叔丁基 ) 酚 及氯化三苯基锡的抗雌激素作用进行了测试。结果表明 :氯化三苯基锡显示出极强的抗雌激 素作用 ,强度超过了抗乳癌剂三苯氧胺及其代谢产物 4羟基三苯氧胺。可以推测出有机锡造成软 体动物的雄性化作用可能是由其抗雌激素作用引起的。6 种酚类物质中 ,除 4乙基2 ,6二叔丁基 酚外 ,其他 5 种显示出弱抗雌激素作用。值得注意的是 : 当 4壬基酚显示出雌激素促进作用时 ,4 n壬基酚却显示出抗雌激素作用。 关键词 　酵母双杂交系统 ; 抗雌激素作用 ; 雌激素促进作用 ; 壬基酚 ; 有机锡 中图分类号 　X 17 越来越多的研究表明一些人工合成的化学物质进入生物体之后 ,显示出内分泌干扰作用 , 影响野生生物的生殖发育。具有内分泌干扰作用的化学物质中 ,其中一些是通过和雌激素受 体结合而影响生物体生殖机能和生殖器发育的。目前筛选能和雌激素受体结合的化学物质的 体外实验方法有受体结合活性法和将雌激素受体基因克隆到酵母和培养细胞的方法。受体结 合活性法只表示了待测物质和受体相结合的活性 ,但无法区别化学物质通过和受体结合而诱 导雌激素作用的促进作用和化学物质通过和受体结合而抑制内源性雌激素和受体结合的所谓 抗雌激素作用[1 ] 。而利用了克隆有雌激素受体基因的酵母和培养细胞的实验系统的原理是: 待测物质通过和受体结合后 ,在细胞内由发现基因传达情报 ,最后通过测定酶的诱导活性或细 胞繁殖等与雌激素作用的信号 ,能够区分促进和抗雌激素作用的方法。但是到目前为止 ,利用 体外生物检测法对内分泌干扰物质进行筛选的工作中 ,往往着眼于雌激素促进作用而很少有 关抗雌激素作用的研究报道[2 ] 。 本研究建立了用酵母双杂交体系筛选物质的抗雌激素作用的方法 ,并用此方法对氯化三 [3 ] 苯基锡 及 4n壬基酚、2sec丁基酚、2羟基联苯、3叔丁基酚、2叔丁基酚以及 4乙基2 ,6 ( ) 二叔丁基酚等 6 种酚类物质 结构如表 1 的抗雌激素作用进行了测试。 ) ( ) ( ) 　1 国家杰出青年科学基金 、国家自然科学基金委员会试点创新研究群体科学基金 和环保“863 ” (2001AA6460105) 资助项目 　2) 通讯联系人 ,Email :hujy @urban. pku. edu. cn 收稿日期 :; 修回日期 : ( ) 450 北 京 大 学 学 报 自 然 科 学 版 　　 第 39 卷 　 1 　材料与方法 1. 1 　试剂与仪器 实验用培养基为去除了亮氨酸和色氨酸的 SD 培养基 ,测定抗雌激素作用和毒性用的双 杂交酵母基因工程菌株 Y190 由日本大坂