13.胃肠安丸抗轮状病毒作用的体内试验.pdfVIP

胃肠安丸抗轮状病毒作用的体内试验 天津医科大学微生物教研室 李晓眠、张婧 【摘要】目的：研究胃肠安丸体内抗轮状病毒作用。方法：复制SA11株轮状病 毒感染小鼠模型，比较胃肠安丸与病毒唑的治疗作用，分别观察小鼠给药前后大 便次数、性状、食欲、活动及其他体征，病毒感染前后检测大便轮状病毒抗原； 感染后第4天心脏取血测定细胞因子TNF-α IFN-γ；取脾脏做T B淋巴细胞 增殖试验；取小肠做HE染色观察小肠组织病理改变；采用免疫组化染色观察乳 鼠空肠RV抗原分布； CPE法滴定乳鼠小肠中RV滴度。结果：胃肠安丸中剂量 组中TNF-α及IFN-γ值与病毒对照组比较，差别有统计学意义（P0.05）；胃肠 安丸高剂量组的T B淋巴细胞刺激指数与病毒对照组比较，差别有统计学意义 （P0.05）；HE染色，免疫组化和CPE滴定乳鼠小肠中RV滴度的结果分别提示 胃肠安丸可减轻乳鼠小肠的病理变化，有效抑制了乳鼠小肠的RVSA11抗原的表 达，降低小肠中RV滴度的作用。结论：胃肠安丸具有良好的体内抗轮状病毒作 用。 【关键词】胃肠安丸；轮状病毒；动物模型；乳鼠 轮状病毒(rotavirus,RV) 属呼肠孤病毒科，是婴幼儿急性感染性腹泻的主要病 [1] 原体。占婴幼儿腹泻的 50 。目前对其治疗仍以补液维持水电解质平衡为主， 尚无较好的抗病毒药物。胃肠安丸为纯中药制剂，处方由11味药组成。现代药 理学实验证明其有明显的抗腹泻作用，对金黄色葡萄球菌 伤寒沙门菌 乙型溶 血性链球菌 肺炎链球菌及痢疾志贺菌 宋内志贺菌 鲍氏志贺菌等8株菌种均 有明显的杀菌作用，还对致病病毒的基因有一定影响，可达到降解病毒核酸的目 [2] [3] 的，与西药相比具有明显的优势 。在临床应用胃肠安丸治疗小儿RV疗效确切 及体外对RV有抑制作用的基础上，进一步验证体内抗RV的作用，为此进行了 本实验研究。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1病毒株与细胞株 猴轮状病毒SA11株，非洲恒河猴肾细胞（MA104细胞）。 1.1.2药物 胃肠安丸由天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂提供，国药准字 病毒唑购于山西太原药业有限公司，国药准字 1.1.3 实验动物 由中国医学科学院放射研究所医学实验动物中心，实验动物许可 证号：SCXK （津）实验动物2005-001。SPF级健康昆明小鼠10 只,孕晚期购回, 乳鼠自然娩出，共10 窝60 只乳鼠，雌雄各半，体重1.5～2.5g，平均1.8g。 试验前成年鼠大便轮状病毒抗原均为阴性。 1.1.4 试剂和仪器 DMEM-HG 培养基(Gibco)，胎牛血清(Gibco)，胰蛋白酶 (Hyclone)，ConA(Sigma)，LPS(Sigma)，MTT(Sigma)，生物安全柜(HealForce)，倒 置显微镜(Nicon)，低温高速离心机(eppendorf)，酶标仪(MultiskanMK3,Thermo Labsystems 公司)，超薄切片机(LKB-V2088,USA)，RVAg 酶联免疫分析(RD)， mouseTNF-α mouseIFN-γ(达科为生物技术有限公司) 1.2 方法 1.2.1 猴轮状病毒 SA11 株的传代及毒力测定 MA104 细胞在DMEM-HG 培养 基(含100U/ml青霉素 100U/ml链霉素及 10％胎牛血清)中培养传代。将 SA11 株在 MA104 细胞上多次传代提高病毒毒力，病毒液离心后 -70℃保存备用。按 病毒致细胞病变作用（CPE）终点稀释法，在 96 孔细胞培养板上滴定半数组织 -6.3 培养感染量（TCID ）为10 。 50 1.2.2 药物的配制 取胃肠安丸药物1g乳钵中研碎，放刻度离心管中加水至 10 ml，水浴煮沸 20 分钟，离心 2000r/min，10min，取上清，4℃冰箱保存备用。 1.2.3 病毒感染模型复制及分组治疗 观察 3 日龄乳鼠共 60 只，将同一母鼠喂 养的乳鼠分为不同的组，以排除母乳喂养可能造成的干扰。将 60 只乳鼠随机分 为 6 组，每组 10 只，即正常对照组 （A 组）