第七章-生物药物成分的提取纯化技术.pptVIP

二、生物药物常用的提取方法与优化 （一）几种常用提取方法 1．酸、碱、盐水溶液提取方法 2．表面活性剂提取方法与反胶束提取方法 3．有机溶剂提取 4. 双水相萃取法 5．超临界萃取法 （二）提取方法与优化1.溶剂选择2.选择添加剂 ①保护剂； ②酶抑制剂3.提取条件 ①温度； ②pH； ③盐； ④表面活性剂 三．浓缩与干燥 1.浓缩方法： ①盐析； ②有机溶剂沉淀； ③高分子脱水 ④超滤； ⑤真空浓缩或薄膜浓缩；  2.干燥：①低温真空干燥；②喷雾干燥；③冷冻干燥 四、分离纯化 1.生化制药工艺中分离纯化特点: (1) 生物材料组成复杂 (2) 目的物含量低 (3) 易变性、失活 (4) 分离方法有很大经验成分 (5) 步骤多，逐级分离 (6) 产品验证与化学上纯度概念不完全相同 2. 分离纯化原理 P162页 (1)根据分子形状与分子大小 (2)根据电荷差异 (3)根据分子极性与溶解度大小 (4) 根据吸附特性 (5) 根据生物配基特性 3. 选择原则 （1）粗品分离：大处理量,相对低分辨率 盐析，分级沉淀，萃取，超滤 （2）精制：高分辨率 多种色谱层析法,亲和层析，HPLC，FPLC，电泳或等电聚焦 五、生物制药下游技术的特点 1、培养液（或发酵液）中所含欲分离的生物 药物浓度很低，杂质含量高，需进行多步分离 操作。 2、稳定性较差，加热、pH、有机溶剂等可引起 失活或分解。 3、生物变异性大 4、注意生物安全问题 生物药物的分离纯化原则 在分离纯化的设计中需要考虑的因素： 1、抑制宿主细胞或分泌产物中相应的酶活性，防止其 消化降解待提纯产物。 2、使目标产物成分有较高的纯度，降低对人体有害的 非目标成分的含量。 3、保证生物药物的安全、有效。注意每个生产环节的 时效性，对每一步骤的质量进行监控。 4、尽可能优化分离纯化工艺，减少分离步骤，降低生 产成本。 生物药物的分离纯化 1、溶剂与试剂 2、pH 3、添加物 4、分离纯化前准备 分离纯化的基本工艺流程 预处理 → 细胞破碎与碎片处理 → 可溶性杂质的去除 → 分离纯化 分离纯化单元操作的特点 1、各种技术相互交叉，新型的分离纯化 方法不断涌现 2、注重新材料的研制 3、分离纯化设备推陈出新，发展迅速 分离纯化方法的选择 1、初步分离纯化方法的选择 2、多种分离纯化方法交替使用 第四部分 知识与能力测试 1、组织捣碎法如何防止因发热和升温过高引起的有效成分的变性？ 答：为了防止发热和升温过高引起有效成分的变性，通常转10~20s，停10~20s。 2、选择细胞破碎方法的原则是什么？ 答：最佳破碎方法与最佳破碎条件相结合，以达到高的产物释放率；与后面的分离纯化相结合考虑，便于产物的提取；低能耗，降低成本。细胞的破碎方法很多，有物理方法、化学方法、生物方法等。 3、板框过滤的操作由哪几部分组成？ 答：板框过滤机的操作是间歇的，每个操作循环由装合、过滤、洗涤、卸渣、整理五个阶段组成。 4、为什么进行超滤前料液要进行预处理？超滤膜如何清洗？ 答：超滤法中待处理的溶液如果含有较多的固体杂质、胶体等，这些物质极易黏附和沉淀在膜的表面，造成膜孔的堵塞而降低超滤效率。 P142 5、泡沫分离必须具备哪两个基本条件？ 答：首先，所需分离的溶质应该是表面活性物质，或者是可以和某些活性物质相络合的物质，它们都可以吸附在气-液界面上；其次，富集质在分离过程中借助气泡与液相主体分离，并在塔顶富集。 6、离子交换分离中如何来判断色谱柱的装填效果？ 答:操作时是否连续、交换是否完全等。 何谓超临界流体萃取技术?其特点有哪些？为什么超临界萃取技术工艺中常常选择CO2作为萃取剂？ 答：它以超临界流体作为萃取剂，在超临界状态下，从物料中萃取待分离的组分，然后借助压力、温度的改变使超临界流体变成普通气体，被萃取物质则完全或基本析出，从而达到分离提纯的目的，所以在超临界流体萃取过程是由萃取和分离组合而成的。 CO2临界温度为接近常温，适于分离对热敏感物质；临界压力容易达到；可以渗入原料，提取完全；选择性好；无毒，不易残存在提取物中；化学稳定性高；价格低廉，可以重复使用。P139 8、疏水色谱与离子交换色谱的操作有何不同？ 答:不同的是，反相和疏水色谱的平衡缓冲液是高浓度的盐溶液，除去蛋白质等分子表面的水化膜，有利于产生疏水作用。 9、简述真空冷冻干燥的过程？