茶树Mn-SOD基因在大肠杆菌中的高效表达.pdfVIP

安徽农业大学学报，2008，35(2)：234—238 Journal of Anhui Agricultural University 茶树Mn．SOD基因在大肠杆菌 中的高效表达 刘守安，韩宝瑜 ，付建玉，秦华光 (中国农业科学院茶叶研究所，杭州310008) 摘 要：聚合酶链式反应(PCR)扩增茶树嫩叶锰超氧化物歧化酶基因，并与原核表达载体pE 122b(+)连接， 构建重组质粒pET／msod，将该质粒转化至大肠杆菌Escherichia coli BI21(DE3)，获得转基因工程菌BI21- pET／msod。在1 mmol-L 异丙基硫代．B．半乳糖苷(IPTG)诱导下，重组蛋白得到高效表达，酶活性可达2×10 u-L-。。SDS．PAGE检测表达蛋白分子量为25 kD，与通过核苷酸推测的分子量一致。 关键词：超氧化物歧化酶；茶树嫩叶；原核表达 中图分类号：$571．1 文献标识码：A 文章编号：1672-352X(2008)02-0234-05 High efficient expression of msod gene from tea plants in Escherichia coli LIU Shou—an，HAN Bao—yu，FU Jian—yu，QIN Hua—guang (Tea Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences，Hangzhou 3 10008) Abstract：The msod gene from the young leaves of tea plants was amplified by PCR，cloned and joined the ex— pressing vector pET22b(+)SO as to construct the recombinant plasmid pET／msod．The pET／msod was trans— formed into Escherichia coli BI2 1 to obtain the recombinant E．coli BI2 1一pET／msod．The recombinant Mn—SOD was expressed under the induction of 1 mmol·L～ IPTG．and the activity of the recombinant protein was about 2× 10 U·L一 ．A molecular mass of the expressed protein was 25 kD determ ined by SDS—PAGE．according with the pre— diction by the msod nucleic sequence．The msod gene was successfully expressed in E．coli，to which would be re— ferred for the applied research． Key words：superoxide dismutase；young leaves of tea plants；expression in Escherichia coli 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，简称 的发展 』。有报道称Mn—SOD在抑制视网膜病、糖 SOD)(EC．1．15．1．1)系一类金属酶，在植物界普遍 尿病和心肌病致病机理方面也有重要作用 』。国 存在。超氧化物歧化酶能够催化超氧阴离子发生歧 外把SOD作为食品添加剂用于口香糖和饮料中，国 化反应，而清除超氧阴离子。据酶活性中心金属原 内也开发了多种含有SOD的食品。茶树富含超氧 子的种类，将植物SOD分为Mn SOD、Cu／Zn．SOD和 化物歧化酶。2004年 Singh等克隆测序了茶树 Fe—