常温和低温下保存小新月菱形藻的包埋-脱水法.pdfVIP

968 植物生理学通讯 第44卷 第5期，2008年 l0月 常温和低温下保存小新月菱形藻的包埋 ．脱水法 薄岩，张恩栋，王起华 辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连 116029 StorageofNitzschiaclosterium f．minutissimabyEncapsulation-dehydration underNormalTemperatureandLow Temperature BOYan，ZHANGEn—Dong，WANGQi—Hua CollageofLifeSciences，LiaoningNormalUniversity,Dalian,Liaoning116029,China 提要：用包埋一脱水法在常温和低温下保存小新月菱形藻(Nitzschiaclosteriumf．minutissima)，探讨了温度、光(暗)、含水量、 密封袋内空间体积和密封袋外膜材质等因素对保存效果的影响。结果表明，小新月菱形藻在4℃下暗保存6个月后的最高 存活率达到80．4％。而且，保存后的藻细胞经过恢复培养后，其生长力可达到保存前的水平。包埋．脱水法操作~1rx日J,-单，无需 复杂设备，在藻类种质保存中有广阔的应用前景。 关键词：小新月菱形藻；常温保存；低温保存：包埋．脱水法 饵料硅藻在鱼、虾和贝类育苗生产中有着重 等因素对保存效果的影响，以寻求一种适合于藻类 要的作用，近年来有关饵料硅藻保存的研究 日益受 中期保存 的新方法 。 到重视(朱明等2003；王起华等2006)。目前微藻 材料与方法 保存技术主要包括：继代保存法、干燥保存法和超 低温保存法等(Day1999)。继代保存法是 目前普 1材料 遍采用的方法，该法简单易行，通常在常温或常低 小新月菱形藻(Nitzschia closterium f． 温下保存。但是，其缺点是保存时间短，需要频繁 minutissima)由辽宁师范大学藻类生理实验室提 继代，并且容易发生污染和变异，只能用于藻类的 供。实验材料培养在含 100mLf／2培养基的250 短期保存(Day1999；潘克厚和朱葆华2002)。干 rnL三角烧瓶中，(20~2)℃，冷荧光，光照强度(50+4) 燥保存法 目前只能用于某些蓝藻和少数绿藻，且大 ~tmolm·-2．S～，光周期L：D=14：10，培养条件参见王起 多存活率~ (Day1999)。超低温保存可能是微 华等(2006)。 藻长期保存的最好方法，但是需要较为复杂的操作 2包埋和脱水 技术和贵重的保存设备，且只能保存微量的藻种 2．1包埋 将静止初期的藻细胞包埋在直径约3．5 (Day1999)。因此，该法不适合藻种的中期保存，也 lrffn的褐藻酸钙胶球 中，包埋后的藻密度为 1．0×10 无法满足大量藻类保存的需要。采用细胞固定化 细胞 ／胶球。将胶球置于消毒海水中，在(20~2)℃ 技术(常用褐藻胶包埋法)保存藻种可能是藻类保存 暗放置24h备用。包埋方法参见王起华等(2006)。 的一条新途径，已有研究表明，此法可以在常低温 2．2脱水及含水量的测定 取上述胶球每 120个为 下实现对某些微藻的中期 (数月至数年)保存 一 组，分别脱水至93．O％(未脱水对照)、91．O％、 (Hertzberg和Jensen1989；马志珍和张继红 1998； 88．5％、81．5％和58．8％含水量(以脱水后的胶球 Chen2001：Gaudin等2006；孟妍等2008)。将褐藻 鲜重为底)，脱水和含水量的计算方法参见王起华等 胶包埋技术与干燥脱水技术相结合的包埋一脱水法 (2006)。 虽然已经成功地用于小新月菱形藻等硅藻的超低温 3甘油处理 保存(王起华等2006)，但采用此法在常温和(或)低