RNA干扰YAP基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响.pdf

第 37卷第 1期 同济 大学 学报 (医学版 ) VOl_37No．1 2016年 2月 JOURNALOFTONGJIUNIVERSITY(MEDICALS~ CE) Feb．，2016 doi：10．16118／j．1008—0392．2016．01．003 ·基础研 究 · RNA干扰 YAP基因对人乳腺癌 MDA—MB一231 细胞生物学行为的影响 花开尧，宋洪明，宋佳璐，李登峰 ，房 林 (同济大学附属第十人民医院甲状腺乳腺外科，上海 200072) 【摘要】目的 探讨RNA干扰YAP基因对人乳腺癌MDA．MB一231细胞生物学行为的影响。方法 使用阳离子 脂质体转染试剂LipofectamineTM2000将靶向沉默YAP基因的siRNA序列转染至乳腺癌MDA．MB一231细胞中，采 用qRT—PCR和Western印迹法分别检测转染后MDA—MB一231细胞中YAP基因及蛋白的表达水平 ，噻唑蓝 (Mrr) 实验和细胞平板克隆实验检测转染前后细胞增殖的变化 ，Transwell小室和划痕实验观察转染对细胞侵袭及迁移的 影响，流式细胞术评价转染后细胞周期及凋亡的变化情况。结果 转染 siRNA后 ，YAPRNA和蛋白的表达量相对 于空白对照及阴性对照组均明显下降(P0．01)。MTT实验及细胞平板克隆实验显示，siRNA干扰 YAP表达可 以显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖活性；Transwell小室及划痕试验显示，siRNA干扰 YAP的表达可以 明显抑制乳腺癌MDA—MB-231细胞的侵袭及迁移能力；细胞周期实验显示，沉默YAP后 ，细胞周期出现 G。／G 期 阻滞，细胞凋亡检测证实沉默YAP后细胞凋亡率并未出现明显上升。结论 抑制YAP在乳腺癌细胞的表达可有 效降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力，改变细胞周期分布，但对细胞凋亡无明显影响。 【关键词】乳腺肿瘤；Yes相关蛋白；siRNA；细胞功能 【中图分类号】R737．9 【文献标志码】A 【文章编号】1008—0392(2016)01—0012—06 EffectofRNA interferencetargetingYAP geneon breastcancerMDA．MB．231cells HUAKai-yao，SONGHong—ming，SONGJia-lu，LIDeng-feng，FANGLin (Dept．ofBreastandThyroidSurgery，TenthPeople’SHospital，TongjiUniversity，Shnaghai200072，China) 【Abstract】 Objective ToinvestigatetheeffectofsmallinterferingRNA (siRNA)targetingYAP geneonbreastcancerMDA—MB一231cells．M ethods siRNA targetingYAP genewastransfectedin humanbreastcancerMDA．MB一231cellswith Lipofectamine 2000．The effectofsiRNA on cell proliferation was assessed by MTT assay；cellmigration and invasion were examined by colony formationassay，Transwellmigration assay andwoundhealingassay；cellcycleandapoptosiswere evaluatedbyflow cytometry；theexpression ofYAPmRNA na dprotein inMDA—M B一231cellswas detecte