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在变铅青链霉菌基因组中定域克隆外源DNA的置换性载体及通过反选择获得重组体的模式方法
卷 期 生 物 工 程 学 报
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（华中农业大学生命科技学院 武汉 ）
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摘 要 ? 是变铅青链霉菌 中对噬菌体 显示抗性的基因，已从基因组中
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获得分离。将基因组中邻近于该基因两侧的一个 和另一个 的 片段分别以
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其在染色体上的天然取向插入到一个由 衍生的质粒 上，构建成 。然后
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在 上对应于 复制子的区域中插入一个 ／ 抗性基因，同时在 和
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片段之间插入一个潮霉素抗性基因（ ），衍生出一个新质粒 。由于
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中不具有完整的 复制功能区，所以它不能在链霉菌中复制。然而，在该质粒 和
63!%! 2ABC0
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片段之间插入的任何 片段，在导入到变铅青链霉菌中后都可借助于 和
2A#C0 D9 2ABC0
两个片段与内源染色体的同源区域所发生的双交换而稳定地整入到内源染色体的特
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