大花蕙兰基因组DNA提取及RAPD反应条件探索.pdf

热带亚热带植物学报 2006，14(1)：25—30 JournalofTropicalandSubtropicalBot~my 大花蕙兰基因组DNA提取及RAPD反应条件探索 李冬梅 ，一，朱根发 ，叶庆生 (1．华南师范人学生命科学学院，广尔省植物发育牛物上程雨点实验审，J州510631；2．广东省农业科学院花卉研究所， 州510640) 摘要：用SDS、CTAB和改良CTAB法分别提取大花蕙兰叶片基因组DNA，发现以改良CTAB法提取的DNA纯度 高，产牢也较高。以5’．GGTGCTCCGT．3’(BA440)为随机引物，并 以人花蕙兰品种 金‘杯’(Cymbidiumhybridiurn CV．HiroshimaGoldenCup “SunnyMoon”)的DNA为模板，对RAPD (RandomAmplifiedPolymorphicDNA)反应体 系进行了优化研究，结果表明，25 l反 体系r}-，Mg、 DNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP5种主要成分的适 宜浓度或用量分别是：2．0mmoUL、1．0U、0．20ixmol／L、25ng和O，20mmol／L。扩增程序优化为：94~C预变性4min；94~C 变性0．5rain，37C退火 lrain，72℃延伸 lmin，40个循环；最后72℃延伸 7min 关键词：人化蕙兰：举因组DNA提取：CTAB；RAPD 中图分类号：Q523 文献标识码 ：A 文窜编号：1005—3395(2006)0l一0025—06 GenomicDNA ExtractionandRAPD ProtocolsforCymbidium hybridium LIDong—mei1,2 ZHUGen—fa 。 YEQing—sheng’ (1，CollegeofLfieScience，SouthNornudUniversity,GuangdongKeyLabofBiotechnologyforPlantDevelopment，Guangzhou 510631，China；2．FloricuhuralResearchInstitute，GumtgdongAcademyofAgricuhuralScience，Guangzhou510640，China) Abstract： SDS，CTABandmodifiedCTABmethodswereusedtoextractDNA from theleavesofCymbidium hybridium CV，HiroshimaGoldenCup “SunnyMoon”andCV．Fortissimo “Pianist”．Theresultsshowedthat modifiedCTABmethodwasbestforDNA qualityandproduction．TheoptimalreactionofRAPD ine hybr Mm wasstudiedwithprimer5’一GGTGCTCCGT-3’forCV．HiroshimaGoldenCup “SunnyMoon”．Theoptimum concentrationoffiveimportantcomponentssuchasM ， DNA polymerase， primer templateDNA， and ， dNTPin25IxlRAPD reactionsystem were2．0mmol／L， 1．0U， 0．2OIxmol／L， 25ng and0．20mm ol／L。 ， respectively．Modifiedthermalprofileconsistedofallinitialdenaturationstepat94℃ f0r4min．followedbv40 cyclesof94℃ for30 S，37℃ ofrlrain a