核酸检测中两种核酸提取方法的比较.pdfVIP

· 388 · 中国自然医学杂志2008年 10月第 1O卷第5期 ChinJNatMed，October2008 Vo1．10N 5 ， 【方法学研究】 核酸检测中两种核酸提取方法的比较 李活，曾劲峰，尚桂芳，叶贤林，庄乃保，许晓绚，马兰，古醒辉 【关键词】 核酸检测；核酸半自动提取：核酸 自动化提取 为了提高输血安全，有效缩短EIA的 “窗口期”，检出病 STARLET用2OOO 带滤芯一次性加样针直接把标本混合好， 蠢变异侏，降低血源性病毒的传播 ，深圳市血液中心除 取360 l}昆合标本加到AGOWA上的8孔塑料管，仪器自动加 按献血法要求对血液进行常规检测外，还对常规检测结果合 入裂解液，裂解后加入磁珠与去抑制剂的混合液，然后分别 格的血液标本进行核酸检测。目前在国内标本汇集与产物扩 用洗液A，洗液B，洗液C进行洗涤，最后加入洗脱液进行洗 四鄙已经实现自动化操作，在提取病毒核酸时，有手工、半 脱，再从AGOWA上的8孔塑料管取8O 洗脱液到96孔反应 _劝和全 自动提取。半 自动提取是对常规检测合格的血液采 板，总核酸提取完成。整个操作过程 由电脑控制 自动完成。 8人份汇集，用核酸提取仪KHB一2000进行半 自动提取。 如有阳性标本需要拆分，直接把需要拆分的单份标本取360txl 自动提取操作繁琐 ，对操作人员的技术要求高，很难保证 加入AGOWA上做提取。 j高的精确度，同时由于操作人员长时间逗 留在实验室，也 1．2．2 手工半 自动提取 ：血液标本放在全 自动汇集仪STAR 易造成 llNA酶的污染，影响核酸提取效率，造成 HCV／HIV 一 200上，每人份取250 1，将 8人份的血清加入一个1．5m2 阴性的发生，不适合大批量血液核酸筛查，只有提高核酸 Eppendorf汇集管上，手工给每个汇集管分别编号后 ，再转移 j2-取的自动化程度，才能有效解决以上问题。由上海科华实 到生物安全柜内进行操作，在汇集管中加入浓缩液40 和促 盈系统有限公司研发的 Hami2tonSTARLET全 自动汇集提取 沉剂50 ，用漩涡震荡仪进行充分震荡混匀后，把汇集管放 仪，把样本汇集与核酸提取合并在一起。在保证核酸提取效 入4℃高速离心机再离心(12500r／min×60min)。拿出离心 率的同时，有效地节省了实验室的空间，减少了人工操作可 好的汇集管，用移液器吸去上清液 ，留120 底部液体在漩涡 能带来的污染和失误 ，特别适用于集中化检测，尤其是大批 震荡仪震匀，轻离心，吸100 血清加入已经加好磁珠与去抑 量的m液标本的核酸检测，提高自动化程度是必然之选。 制剂混合液的塑料板 1，然后加入裂解液，在塑料板 1上放上 1 材料和方法 梳子，放进核酸提取仪 KHB一1000开始提取，按步骤更换预 】．1 仪器与试剂 加洗液A，洗液B，洗液C的塑料板2，3，4和预加8O 洗脱 全 自动汇集提取仪 STARLET(上海科华在HamiltonStar 液的塑料板5，总核酸至提取完成。如有阳性标本需要拆分， 基础上开发)，AGOWAmaxisep7200，全 自动汇集仪STAR一 直接把需要拆分的单份标本取100 加入塑料板 1上做提取。 200(Hanfihon)，漩涡震荡仪 MS2 (2KAWORKSGUANG— 2 结 果 zⅢ)IJ)，生物安全柜 BHC一1600IIA／B (苏净集 团安泰公 2．1 全 自动提取与半 自动提取的提取效率比较 州)，低温高速离心机2