海洋低温溶菌酶对人脐静脉内皮细胞超微结构的影响.pdf

第27卷第2期 电 子显微学报 V01．27．No．2 2008年4月 of Electron 2008．04 JournalChinese MicroscopySociety 文章编号：1000．6281(2008)02．0136．04 海洋低温溶菌酶对人脐静脉内皮细胞超微结构的影响 苏 爱1，王振华2，刘金成2，王春波3’ (青岛大学医学院1．细胞与分子生物学实验室，2．生物学教研室，3．人体机能学实验室，山东青岛266021) 摘要：目的：观察海洋低温溶茵酶对体外培养的人脐静脉内皮细胞超微结构的影响，探讨海洋低温溶茵酶抗肿 瘤血管形成的机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，用不同浓度的海洋低温溶茵酶处理24h后，利用透射电镜 观察细胞超微结构的变化。结果：海洋低温溶菌酶处理后人脐静脉内皮细胞出现超微结构变化，包括核内染色质 浓缩及边集，胞质内细胞器肿胀和空泡化，呈现典型的细胞凋亡改变。这种改变呈剂量依赖性。结论：海洋低温溶 茵酶可引起人脐静脉内皮细胞损伤，导致细胞凋亡，从而可能诱发其抗肿瘤血管生成的作用。 关键词：海洋低温溶茵酶；人脐静脉内皮细胞；超微结构；抗血管生成；细胞凋亡 文献标识码：A 中图分类号：R282．77；R322．1+2；Q336 溶菌酶(Lysozyme)，又称胞壁质酶(Muramidase) 牛血清为杭州四季青生物工程材料研究所产品。锇 或N．乙酰胞壁质聚糖水解酶(N．acetyl．muramyl glyean．hydrolase)，专门作用于细菌细胞壁的骨架物酸及Epon．812由美国SERVA公司生产。 质一肽聚糖，是广泛存在于高等动植物组织及分泌 1．1．3仪器 物、原生动物、昆虫和各种微生物中的一种无毒蛋白 电镜。 质。溶菌酶在医学领域有很高的应用价值，可与血 1．2方法 液中病菌或病毒结合，而具有消炎、抗病毒、抗肿瘤 1．2．1细胞培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培 及止血等作用…。一般的溶菌酶多由蛋清中提取， 仅对革兰氏阳性菌有作用。海洋低温溶菌酶 庆大霉素100U／m1)，并在5％CO：培养箱中，37℃培 (Marine low．temperaturelysozyme)是从海洋嗜极微生养，隔天换液1次，每3天传代1次。 物的代谢产物中分离到的一种新型溶菌酶，与蛋清 细胞传代时，弃去培养液，用0．25％的胰酶(用 溶菌酶相比，具有嗜低温、抗氧化及溶菌谱广的特 min 7．4的PBS配制，过滤除菌，4。C保存)消化7 pH ml。2 点，能特异地分解革兰氏阳性、阴性菌的细胞壁形成 。8min．加入1 ml新鲜培养基，用弯头吹管 溶菌现象怛’31。对其抗肿瘤活性的初步研究表明，海 轻轻吹打瓶底数次至细胞完全脱落，然后以1：3分 洋低温溶菌酶具有血管生成抑制因子的活性，故对 瓶传代培养。 肿瘤生长具有明显的抑制作用HJ，但对其抗血管生 1．2．2药物处理取对数生长期细胞以5×105／ml 成作用的机制未做进一步研究。为了进一步探讨其 密度接种于培养瓶中，待细胞生长融合达90％时， 抗肿瘤血管形成机制，本文对海洋低温溶菌酶对人 加入海洋低温溶菌酶。实验分为四组：对照组(不加 umbilicalveinendothelial 脐静脉内皮细胞(Human 药物)、海洋低温溶菌酶低剂量组、中剂量组和高剂 cel