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维普资讯
第27卷第4期 水 产 科 学 V0I_27No．4
2oo8年 4月 FISHERIES SCIENCE ADr．2008
扩增香螺 SSR指纹研究的试验条件的优化
隋 娜，侯 林，董长勇，李 妍，王明昌，张 筠
(辽宁师范大学 生命科学学院，辽宁 大连 116029)
摘 要：利用SSR技术对香螺进行了PCR扩增，探索香螺基因组DNA的提取方法。从香螺23对近缘
种引物中筛选出8对可以扩增的引物，对引物浓度、Taq酶浓度、循环次数、模板浓度等方面进行了研
究，从而探索出一个适合香螺 SSR分析的反应体系和反应条件并对微卫星引物通用性进行初步分析。
关键词：香螺；SSR；条件优化
中图分类号：Q25 文献标识码 ：A 文章编号：1003．1111(2008)04-0199-04
香螺(Neptuneacumingi)主要分布于我国黄海 体系和反应条件。
和渤海的北部，大连沿海岛屿香螺产量最高。香螺
l 材料与方法
壳大而质厚，其肉味鲜香，为人们所喜食。香螺属
软体动物门、腹足纲、峨螺科、香螺属。微卫星又称 1．1 材料
简单重复序列 (Simplesequencerepeats，SSRs)，一 香螺样本分别取 自大连 (长海、庄河、旅顺)、锦
州、东港、山东等地。所有活体快速运回实验室冻
般由1～6bp长度的核心序列重复串联而成，其两
存，平均壳高 (9．26±4．5)cm。
端侧翼序列相对保守，目前已被证实其广泛存在于
I．2 引物来源
真核生物中，且位点数 目巨大并呈孟德尔共显性遗
本研究在香螺近缘种的23对引物 删 中筛选
传。
出8对能够进行扩增的引物，序列见表 1。以上引
微卫星DNA的核心序列高度保守，其多态性
物以及 PCR所用到的试剂如 rTaq，dNTP等均 由
来源于核心序列重复串联数 目的不同；微卫星DNA
Takara公司合成。
对变异非常敏感，且具有极高的多态性，因此成为
新一代的分子标记。作为分子标记，微卫星具有数 1．3 DNA的制备
1．3．1 提取方法
量多、分布广而均匀，多态性丰富，个体专一性强，
微卫星分析分辨率高，信息量大且具有较高的信息 取香螺肌肉组织约5Omg，剪碎后置于 EP管
中，加400ixlTE，25ixl10％的SDS，5 l20mg／ml
质量，适合用于亲缘关系较近的物种的遗传分析。
由于其呈孟德尔共显性遗传的特点，可通过计算杂 的蛋白酶K，55℃水浴消化4h。分别用等体积的
Tris一饱和酚、饱和酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)、
合度很好地反映群体内的遗传变异。此外，微卫星
DNA标记还具有模板用量少、反应速度快、操作简 氯仿：异戊醇 (24：1)各抽提 1次。2倍体积的冷
无水乙醇和 1／20体积的3mol／
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