蟑螂抗药性实验_任东升.pdfVIP

蟑螂的抗药性实验 任东升 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 E-mail：rendongsheng@ 2009年12月3 日 提纲 蟑螂抗药性的测定方法 药膜法 点滴法 蟑螂点滴法抗药性测定中的实验要点 生物测定的基本原则 灭蟑饵剂的药效评价方法探讨 蟑螂生测方法 针对触杀性灭蟑杀虫剂的生物测定方法： WHO推荐的药膜法 国内使用较多的还有点滴法 蟑螂抗药性监测方案 2008年4月22 日，媒介生物学及控制分会 蟑螂学组组织相关专家讨论草拟了《蟑螂 抗药性监测方案》，方案包含了蟑螂抗性 监测的药膜法和点滴法。 WHO蟑螂抗药性测定：药膜法 这个方法是测量蟑螂种群对给定一种杀虫 剂的敏感性水平。这个技术设计用来检测 一个杀虫剂抗性品系是否出现，什么时候 出现。 药膜法优缺点： 优点：简便、实用； 缺点：不如点滴法的结果精确。 建立基线 把一批蟑螂放在用标准杀虫剂制作的广口 药膜瓶中，观察击倒率。通过这个试验结 果，我们能够得到击倒50 ％和95 ％所需的 时间，即LT50和LT95。每次试验要做5个 重复，每个重复约10只试虫。 这个试验应该在不同的地点、不同的季节 多次进行。 实验条件 试虫：试验最好用蟑螂雄成虫。如果不能 得到足够多的雄性，也可以通过雌虫和若 虫的试验来得到敏感性的信息。 试验条件：试验应该在没有被杀虫剂污染 的房间里进行。蟑螂试验的房间温度20℃ 到30℃之间，相对湿度保持在25 ％以上。 试剂盒的组成： 50ml用丙酮溶解的0.5% 狄氏剂、1.0%马拉硫 磷、0.5%二嗪农、0.1% 残杀威的母液。 4瓶丙酮溶液，每瓶50ml 4个10ml 的量筒 3个5ml刻度吸量管 6个玻璃广口瓶，容量大 约500ml 1瓶凡士林 1瓶石蜡油 一套说明说明书，一套报 表，6张对数机率格纸测 绘回归线 操作程序 1. 蟑螂应该尽可能的从一个地方收集，饲养在一个容器中 直到被使用。 2. 加1ml的母液到9ml的丙酮溶液中稀释。每个广口瓶中放 入2.5ml的稀释液。水平转动这个广口瓶，让稀释液均匀 的覆盖在广口瓶壁和底部，直到丙酮完全挥发。一般来 说，下午处理瓶子，第二天早晨使用比较方便。 3. 在瓶口内侧均匀涂抹凡士林和石蜡油等比例混合物，防 止蟑螂逃逸。这种矿物油的混合物加热的时候更容易混 合。 4. 每个广口瓶中放10个蟑螂，按照记录表中的要求每隔一 定时间记录击倒时间。在每一个观察试验中，直到记录 90－100％的蟑螂被击倒。如果24小时后仍有存活，放一 片马铃薯作为食物。蟑螂返回正常姿势不能爬行被认为 是击倒。 实验数据的处理 先在实验室的敏感种群进行上述试验，结 果记录在附件表中。 蟑螂对有机氯的抗性LT50多超过72小时。 如果用氨基甲酸酯类杀虫剂，试验应该持 续5天，因为氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性表 现为蟑螂可能被击倒，但几天之后会恢 复，因此在这种试验中记录恢复的蟑螂数 量，计算LT50的时候，最初的击倒数目应 当减去恢复的数目。 实验数据的处理：对数-概率纸 实验者通过选定的浓度的四个重复试 验，可以得到时间－击倒的回归线。 试验结果应该在提供的对数－概率纸 上画点作图。回归曲线通过眼睛观察 作图，通过图表读取LT50和LT95。 这条回归线的LT50不应当超过最高的 击倒数。 药膜法浓度的确定 药膜法在使用过程中如何确定使用药膜的 浓度？ WH