生化工程应用e coli 大肠杆菌之生长曲线.pptVIP

微生物之增殖 微生物之環境 微生物之環境 微生物之環境 微生物之營養 生化工程應用E. coli 大腸桿菌之生長曲線 實驗操作日期：90.12.13 報告者：化工所研一陳克強 黃智銘 實驗流程 Autoclave（滅菌）--Autoclave之目的 Autoclave（滅菌） --操作條件 Autoclave（滅菌）--操作時間 固體---25～30分鐘 液體---15分鐘 medium（培養基） M9 mediuml： Na2HPO4?7H2O 磷源KH2PO4 磷源NaClNH4Cl 氮源MgSO4 硫源CaCl2glucose 碳源有時Na、K、Mg、Ca等金屬離子可作為Coemzyme （輔）其所需量很少。 LB medium： Tryptone-bYeast extract-BNaCl 養菌挑菌 (一) 為避免挑菌時污染菌種，以經滅菌的木棒摘取，為避免木棒受污染，必須小心拿取木棒末端。 養菌挑菌 (二) 以木棒挑取固態培養基上的一個菌落（E. coli VJS676），置入含有medium的試管中。 Overnight culture 旋轉式震盪機中以37℃、轉速：85 rpm，作隔夜培養，一般培養12-16小時。 高溫高壓﹝125℃ ~140℃ ﹞heat sterilizer, auto clave 化學藥品酒精，detergent﹝SDS…等﹞ 過濾 三角錐形瓶shaking bath培養 300ml三角錐形瓶中加入30 ml LB medium於shaking bath中，用37℃，108 rpm轉速培養起始濃度設定為0.05（以O.D.值表示），故於Overnight culture所得之菌中，取出0.442ml菌液，加入錐形瓶中培養。 測量O.D----抽樣 抽樣—每隔30分鐘以滴管吸取樣品1ml於比色槽中。 測量O.D. ----量測 利用分光光度計測量於O.D. 600nm時的吸收度。 圖表.1 * * 12 養菌與滅菌 細 菌 細菌及黴菌之生長最適酸鹼值，分別約為pH7及pH5。因而市售培養基，例如NA（或NB）及PDA（或PDB）之酸鹼值，皆已分別調整為pH7及pH5。 微生物之生長對於溫度會有依賴性，可分為最低、最適、最高的三種主要溫度。 依最適生長溫度的不同，而可將微生物分為低溫菌、中溫菌、高溫菌。至於溫度範圍並無依定的規範，因而常有混淆之情形發生。為了方便記憶，或可採用最適溫度來作為區別之依據。 依微生物種類的不同，所適合生長之酸鹼值亦會有所差異。為了方便記憶，可將黴菌及藻類的適合生長酸鹼值定為pH4-6；酵母菌的定為pH5-7；細菌的定為pH7-8。 Autoclave 挑菌，培養基選擇 Overnight culture Shaking bath 培養 分光光度計測量細菌濃度 數據分析 生物工程的實驗要求精確，稍一點污染便會導致失敗，來自外界無數看不見的菌類，都可能在操作時造成污染，為確保實驗儀器、設備無菌，在使用前必須先加以滅菌。 溫度---120～125℃壓力---2 atm 殺菌： Fig. 11.1 Fig. 11.2a Fig. 11.2d Determining cell mass dry weight optical density (O.D.) spectrophotometer O.D. 550 O.D. 600 Fig. 7.17 Fig. 7.18 Fig. 7.19 *