结核杆菌的形态染色与培养特性.pptVIP

实验六内容 1. 示教：白喉、结核杆菌的形态染色与培养特性。真菌、支原体、螺旋体形态与培养特性 2. 自做： a.大便标本分离与鉴定之三 b.抗酸染色 C.真菌染色（新开实验） 3. 实验报告6：抗酸染色；案例分析 示教： （一） 白喉杆菌的形态与培养特性 1.白喉杆菌的形态 2.白喉杆菌的培养特性 （二）结核杆菌的形态与培养特性 1.结核杆菌的形态 2.结核杆菌的培养特性 二.示教： 真菌的形态 支原体集落：荷包蛋状菌落 梅毒螺旋体的形态 钩端螺旋体的形态 示教：真菌培养 Yeast colonies Yeast-like colonies Filamentous colonies 示教：真菌大分生孢子 铁质双糖管的成分 肠道杆菌在铁质双糖管中的生化反应 自做：一、 大便标本分离与鉴定之三 观察铁质双糖管培养现象 对照pp132文字描述，pp133表格。 斜面仍为红色，底面变黄，--分解葡萄糖产酸。 斜面、底面均变黄--分解乳糖产酸。 底面有气泡--产生气体。 有黑色沉淀物--产生H2S。 2. 玻片凝集试验（血清学鉴定） 取一洁净玻片，用接种环挑取生理盐水置玻片中央。（设对照） 用接种环从铁质双糖培养基的斜面上挑取少量菌苔, 混于生理盐水中,并磨匀。 （设对照） 挑取副乙型伤寒抗血清置混合液中,轻轻摇动玻片。（对照一侧不加） 观察结果： 出现凝集为阳性， 不出现凝集为阴性。 自做：抗酸染色 主要材料： 结核病人痰液、抗酸染液、载玻片、显微镜等 方法： 1.制片： 涂片 干燥 固定 2.染色： 滴加石炭酸复红染液盖满标本，加过氧化氢液2-3滴，染2-3分钟，水洗。 用盐酸酒精脱色至肉眼看不见红色为止(30s)，水洗。 加美兰染色染1-2分钟，水洗，印干。 3.镜检：用油镜观察。 自做：真菌检测 乳酸酚棉兰染色 材料：棉兰染液、真菌培养物、接种钩、玻片、盖玻片 方法：滴加一滴棉兰染液在玻片上。 用接种钩钩取少量真菌，混于染液中，盖上盖玻片，轻轻按压盖玻片。 显微镜观察看是否有真菌菌丝或孢子存在，然后换用高倍镜，观察菌丝有否分支、分隔及孢子的形态排列等特点。 实验报告六 抗酸染色 案例分析 案例分析 病例1：患者，女，19岁。就诊时主诉：近一个多月来咳嗽，痰中时有血丝，痰少，多为干咳，无胸痛，但有明显乏力，消瘦，食欲不振，盗汗，自觉午后微热，心悸。查体：T 38℃，慢性病容。实验室检查：血WBC 12×109/L，分类：杆状核3%，分叶核61%，淋巴细胞33%，单核细胞3%，血沉70mm/h。X线透视右肺尖有小块阴影，边缘模糊。 1.本病最可能是什么疾病，由什么病原菌引起？ 2.如要确诊，还应做哪些微生物学检查？ * * Albert’s stain 特点：菌体排列呈栅栏状，有异染颗粒， 真菌大分生孢子 新型隐球菌墨汁塗片 接种梅毒螺旋体的兔睾丸切片。 镀银染色法，组织呈棕黄色， 螺旋体呈棕褐色， 有8-14个致密的小螺旋，两端尖直。 纯培养物涂片。镀银染色法。 螺旋体呈棕褐色，细长丝状， 一端或两端稍弯曲成C、S等形状。 白色念珠菌 新生隐球菌 腐化米霉菌 基础营养培养基 0.1%葡萄糖 1%乳糖 酚红 硫酸亚铁 自做（三）：大便分离鉴定3 通过发酵乳糖大量产酸：培养基全部变黄 通过发酵葡萄糖糖少量产酸：培养基底部变黄 产生H2S：培养基变黑（硫酸亚铁 + H2S FeS ） 产生气体：培养基被顶起（气泡） 乳糖 葡萄糖 H2S 大肠埃希氏菌 伤寒沙门氏菌 副伤寒沙门氏菌 甲型 乙型 志贺痢疾杆菌 + _ _ _ _ + + _ +/-- +/-- +++ _ 注: + 产酸, H2S； 产酸，产气 记录现象，初步鉴定细菌类别