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第八章 抗生素药物的分析 第一节 概 述 抗生素的概念： 具有抑制或杀灭微生物的一类物质。 抗生素的特征： 生物体在生命活动过程中合成的次级代谢产物。 性质不稳定，易降解、聚合 纯度一般较低 临床上会引起不良反应 临床应用广泛，影响大 抗生素药品质量研究的项目： 性状及鉴别试验，含量测定或效价测定，酸碱度测定，澄明度，水分或干燥失重，安全试验（异常毒性），热原，降压物质，无菌。 其他检查：组分、杂质、晶型、比旋度、灰分、重金属、熔点等。 抗生素药品分析常用的方法： 物理方法:旋光法、紫外、红外、色谱等 化学方法（专属性不强）：功能团反应，鉴别和含量的测定。容量分析法：酸碱滴定（青霉素含量测定）和碘量法。 生物学方法：酶反应、微生物法测定效价 第二节 抗生素效价微生物检定法 一、微生物检定法定义： 是利用微生物发育时对某些物质的特殊依赖性，按这些物质对微生物生长的影响，对他们作出定量鉴定的方法。微生物检定法可分为三类：稀释法（dilute method）、比浊法 （turbid compare method）、琼脂扩散法（diffuse method）。 与化学方法相比： 优点：1、原理与医疗要求基本一致 2、对微生物作用直接反映其抗菌活性 缺点：1、结果是总效价，无法区分多组分 2、时间长，有一定误差，操作繁杂 二、抗生素标准效价（potency)单位 牛津单位:抑制50毫升肉汤培养基中金黄色葡萄球菌生长的青霉素的最低含量为一个牛津单位. 一个牛津单位相当于0.6ug的青霉素钠盐所具有的抗生活力，1mg青霉素G钠盐含有1667个牛津单位,(IU) （一）稀释单位 (u/ml，u/mg) 将1mg抗生素配成溶液，在一定条件下进行稀释，对某一细菌能抑制其生长的最高稀释度，即为1mg抗生素中可含有的单位。 （二）重量单位 (u/mg) 以抗生物有效成分（即生理活性部分）的重量作为抗生素的单位。称重量单位.。如一个链霉素碱单位的重量为1微克，一个青霉素G钠盐的单位的重量为0.6微克。同一种抗生素的各种盐的校价可根据其分子量与标准盐类进行换算而得。 青霉素G钾盐的理论效价（U/mg）= 1类似重量单位: 以抗生素盐类纯品的重量为单位。包括无生物活性的酸根和金属离子。 2重量折算单位 以与原始的生物活性相当的纯抗生素实际重量为一个单位， 3特定单位 以特定抗生素某一批产品的某一重量为一个单位，经有关国家权威机构认可而定. 效价测定的方法： 一、稀释法（dilute method） 二、比浊法 （turbid compare method） 三、琼脂扩散法（diffuse method） 一、稀释法 原理：用液体培养基逐级将抗生素稀释，在各管中加入等量的试验菌液，进行培养，观察抑制细菌生长的最低抗生素浓度，再与同法测定的标准品终点作比较，从而求得被测抗生素的效价。 X=(T/S)*C X样品效价(U/ml) T检品液最大稀释倍数 S标准品液最大稀释倍数 C标准品液效价(U/ml) 检测终点判断： 1、试验菌生长完全抑制 2、生长50%抑制 3、指示剂变色 4、电位差的改变 5、菌种的溶血现象等 二、比浊法 原理：将一定量的抗生素加至接种有试验微生物的液体培养基内，混匀后，经短期培养（约3-4h），测量培养基浊度，其浊度与细菌数、细菌群体质量存在直接关系，在一定的范围内符合比耳定律。 细菌数、细菌群体质量又直接受抗生素效价的影响。 影响因素： 一、影响比浊法的物理因素 1、散射现象 2、菌液浓度： 3、细菌体大小的变化 二、培养基：在没有外加抑制剂的情况下，菌体的生长受培养基的成分、酸度、培养温度、通气等条件影响。一般的试验菌是金黄色葡萄球菌，pH在6.8-7.8。 三、培养：温度、振摇。一般培养时间3小时，可缩短为2小时。 操作流程如图： 基本要点： 1 培养条件的控制：试管规格均一 水浴箱水温均匀，试管按拉丁方排列。 2 细菌生长误差的控制： 3 测量时间的控制：各管应先充分混匀，将菌液移入比色皿后静止2分钟后测定。 三、琼脂扩散法（diffuse method） 即管碟法 管碟法原理: 抗生素在涂布特定菌的琼脂培养基内扩散，形成一定浓度抗生素的球型区，抑制试验菌生长，通过透明培养基观察抑菌圈，抗生素剂量的对数与抑菌圈面积或直径成正比。在同样条件下将已知效价的标准品溶液与未知效价的供试品溶液的剂量反应(抑菌圈)进行比较；当标准品和供试品是属于同一性质的抗生素时，标准品溶液和供试品溶液．对一定试验菌所得的剂量反应曲线，在一定剂量范围内应互相平行。根据以上原理，可设计为一剂量法、二剂量法及三剂量法。从而