纳豆激酶的分离纯化及体外溶栓特性研究 - 大豆科学.pdf

第２９卷　第２期 大 豆 科 学 Ｖｏｌ．２９　Ｎｏ．２ ２０１０年　 　４月 ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥ Ａｐｒ．　　２０１０ 纳豆激酶的分离纯化及体外溶栓特性研究 陈晓飞，周伏忠，陈国参，谢宝恩，宁　萌 （河南省科学院 生物研究所，河南省微生物工程重点实验室，河南 郑州 １５０００８） 摘　要：通过硫酸铵分步沉淀和 ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶过滤层析，分离纯化纳豆激酶，并用 ＳＤＳＰＡＧＥ和 ＰＡＧＥ电泳检 测纯化效果，体外溶栓试验检测纳豆激酶的溶栓特性。ＳＤＳＰＡＧＥ显示纳豆激酶为单一条带，分子量为 ３３ｋＤａ，而 ＰＡＧＥ至少有３个具有纤溶活性的区域，表明纳豆激酶可能由几种同工酶组成，体外溶栓结果表明：与蚓激酶相比，纳 豆激酶具有较强的的体外溶栓和抗凝作用，并有一定的溶血作用。 关键词：纳豆激酶；分离纯化；体外溶栓 中图分类号：Ｒ２８４．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１０００９８４１（２０１０）０２０２９５０４ ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＴｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓＥｆｆｅｃｔｏｆＮａｔｔｏｋｉｎａｓｅｉｎｖｉｔｒｏ ＣＨＥＮＸｉａｏｆｅｉ，ＺＨＯＵＦｕｚｈｏｎｇ，ＣＨＥＮＧｕｏｃａｎ，ＸＩＥＢａｏｅｎ，ＮＩＮＧＭｅｎｇ （ＢｉｏｌｏｇｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅｎａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｃｒｏｂｉａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００８，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅｗａｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙ（ＮＨ）ＳＯ ｆｒａｃｔｉｏｎａｌｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎａｎｄＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００ｇｅｌｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｆｒｏｍｃｒｕｄｅＮａｔ ４ ２ ４ ｔｏｋｉｎａｓｅｌｉｑｕｉｄａｎｄｉｔｓｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉｎｖｉｔｒｏｗｅｒｅｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．Ｔｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅｓｈｏｗｅｄａｓｉｎｇｌｅｂａｎｄｏｎ ＳＤＳＰＡＧＥｗｉｔｈｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｏｆ３３ｋＤａ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｓｈｏｗｅｄｔｈｒｅｅｂａｎｄｓｏｎＰＡＧＥ，ｗｈｉｃｈｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅ Ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅｗａｓｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆｓｅｖｅｒａｌｉｓｏｅｎｚｙｍｅｓ．ｉｎｖｉｔｒｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｓｈｏｗｅｄＮａｔｔｏｋｉｎａｓｅｈａｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓ ａｎｄａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔ，ａｎｄｈａｓｓｏｍｅｈｅｍｏｌｙｓｉｓｅｆｆｅｃｔｏｎｒａｂｂｉｔｂｌｏｏｄｃｅｌｌ．Ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅｍａｙｂｅｈａｖｅｓｏｍｅｉｓｏｅｎｚｙｍｅｓ， ｗｈｉｃｈａｒｅｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｏｒｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓａｎｄａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅ；Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓｉｎｖｉｔｒｏ 　　纳豆激酶（Ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅ，简称 ＮＫ）是 日本的传 ＰＡＧＥ测定其分子量；并对酶液做了体外抗凝、溶栓 统食品———纳豆（Ｎａｔｔｏ）在发酵过程中，由纳豆芽孢 和溶血实验，以期为进一步开发利用纳豆激酶提供 杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏ）产生的具有纤溶活性的丝氨酸 依据。 蛋白酶［１－３］，该酶不但具有明显的溶栓活性，而且还 可以激活体内的纤溶酶原，增加内源性溶纤酶的含 １　材料与方法 量，具有降血压、抗氧化、抗肿瘤及重要的溶解血栓 １．１　供试材料 等医药功效；且与传统的溶栓制剂相比，有不易引 １．１．１　菌株　所用菌株为实验室分离的、产酶活 起出血、无抗原性、半衰期长、安全无毒且成本低廉 ［４］ 性较高的菌