变性分开的两条单链可以重新形成双螺旋dna.ppt

* 12.10 在体外双链DNA和RNA可以变性和复性 一个DNA双螺旋可以彻底地解链，分离成两条互补的单链，这一现象称为DNA变性。变性只发生在体外。 慢慢地升高DNA溶液的温度，随着温度的升高，碱基对之间的氢键被破坏，越来越多的碱基对被拆开，当DNA的溶液被加热到一定温度以上时，双链DNA结构被破坏，最后双链完全分开，形成两个单链。 变性分开的两条单链可以重新形成双螺旋DNA，这是变性的可逆过程，称为复性。 核酸复性时，紫外吸收降低，由于核酸复性而引起紫外吸收降低的现象，称为减色效应。 由于核酸变性而引起紫外吸收增加的现象，称之增色效应。 在260nm波长的单链DNA的吸收要比双链DNA的吸收高12~40％，这是因为双链DNA中堆积的碱基对之间相互作用降低了吸收。 由于核酸变性而引起紫外吸收增加的现象，称之增色效应。 吸收值变化对DNA溶液温度的曲线称之DNA融解曲线。由双螺旋到变性状态之间的陡变区反映了双螺旋DNA中堆积的、形成氢键的碱基对的破坏程度。 陡变区中点对应的温度称为熔点（Tm），在熔点处，有一半的双链DNA变成了单链DNA。有机溶剂，如乙醇可以降低DNA的Tm，因为有机溶剂可以降低分子内部的疏水相互作用强度。一些离液剂，如尿素、盐酸胍和甲酰胺也可以降低双螺旋DNA的稳定性。 测定可以根据下面公式计算出DNA的碱基组成。 G-C％＝（ Tm － 69.3）×2.44 核酸中碱基组成对熔点温度的影响 各种细菌的DNA熔点温度（Tm）与其G＋C碱基对的关系 酵母 12.11 不同来源的核酸可以形成杂化体 将从人和小鼠细胞分离出的双螺旋DNA分别通过加热使它们完全变性，然后混合在一起，于65℃下保持数小时，小鼠DNA链与对应的互补的小鼠DNA链重新形成小鼠双链DNA，同样人DNA链也与互补的人DNA链退火，重新形成人的双链DNA。 然而在退火时，一些小鼠DNA链却与人DNA链结合在一起形成了杂化的双螺旋DNA。这表明不同生物在进化上有某些联系。在多数情况下，这些能形成杂化体的DNA编码的蛋白质或RNA可能具有相似的序列（同源性）。生物之间的进化关系越接近，它们的DNA之间的杂化就越广泛。 除了DNA之间可以形成杂化体之外，DNA与RNA之间只要是存在着互补碱基对也能形成杂化的双螺旋DNA-RNA。 完全变性的样品1DNA 完全变性的样品2DNA 样品 1 双螺旋 样品 2 双螺旋 杂化双螺旋 混合并冷却 12.12 核酸酶催化核酸的磷酸二酯键水解 催化核酸中磷酸二酯键的水解的酶统称为核酸酶。核糖核酸酶只作用于RNA，而脱氧核糖核酸酶只作用于DNA。但有些核酸酶既催化RNA水解，也催化DNA水解。 象蛋白酶一样，核酸酶可以根据酶作用的部位不同分为外切核酸酶和内切核酸酶。外切核酸酶水解磷酸二酯键后从多核苷酸链的末端释放核苷酸残基；而内切酶可以在多核苷酸链内的不同位置水解磷酸二酯键。 水解时，既可以在3ˊ,5ˊ-磷酸二酯键的3ˊ酯键处（A），也可以在5ˊ酯键处（B）切断磷酸二酯键。一种类型的水解可以产生5ˊ-单磷酸和一个3ˊ羟基，而另一种水解方式可以产生3ˊ-单磷酸和5ˊ-羟基。书中列出了一些常用的来自不同生物的核酸酶以及它们作用的底物和生成的产物。 核酸酶切位点 12.13 限制性内切酶在特殊部位催化双螺旋DNA水解 限制性内切酶是一类重要的作用于DNA的内切酶。限制性内切酶术语来自一种现象，即某些细菌可以通过特异地破坏侵入的病毒DNA来阻止嗜菌体的感染。这样的细菌称之限制性宿主，因为它们可以限制外源DNA的表达。 限制性宿主可以合成核酸酶，该酶可在特殊的序列区降解外源DNA，但宿主细胞本身的DNA并不受该核酸酶的作用。这是因为宿主DNA可被内切酶识别的特殊部位的某些碱基已经被甲基化了，内切酶不能催化已修饰底物的水解。所以任何进入宿主细胞的，在酶识别的特殊部位没有甲基化的DNA都会受到限制性内切酶的切割。 限制性内切酶识别特殊的DNA序列 酶切位点 酶切位点 对称轴 平末端 粘性末端 要点归纳 1.核酸是由构件分子核苷酸组成的线性聚合物，分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。每一个核苷酸都是由一个戊糖（对于DNA是2′-脱氧核糖，对于RNA是核糖）通过β-N-糖苷键与一个杂环碱基（嘌呤或嘧啶）连接组成的，糖的5′C位通过酯键连接一个磷酸基团。 2. 每一个核苷酸的磷酸基团