犎9 亚型禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建 .pdf

第 卷 第 期 西北农林科技大学学报（自然科学版） ３６ １２ Ｖｏｌ．３６ Ｎｏ．１２ 　 年 月 （ ） ２００８ １２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔ Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ． Ｄｅｃ．２００８ ｙ 犎９亚型禽流感病毒血凝素基因 重组禽痘病毒的构建 １ ２ １ １ ３ １ 陈红英 ，黄青云 ，崔保安 ，李新生 ，赵 丽 ，管 倩 　 　 （ 河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州 ；华南农业大学 兽医学院，广东 广州 ； １ ４５０００２２ ５１０６４２ ３郑州牧业高等专科学校 动物医学系，河南 郑州 ４５０００３） ［摘 要］ 目的】获得表达 亚型禽流感病毒血凝素（ ）基因的重组禽痘病毒。 方法】将含禽痘病毒启动 Ｈ ＨＡ 　 　 ９ 子 驱动的 基因，插入到禽痘病毒转移载体 中，获得重组转移载体 ／ 。用脂质体将其 ＬＰ２ＥＰ２ 犎犃 ｐＳＹ６８１ ｐＳＹ６８１ＨＡ 转染已感染亲本禽痘病毒 ＳＦＰＶ０１７株的鸡胚成纤维细胞，使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重 组，产生表达 ＨＡ的重组禽痘病毒 ｒＦＰＶＨＡ。在含有 Ｘａｌ的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后，对重组病毒进行 ｇ 多次蚀斑克隆，并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中犎犃的表达产物进行鉴定。 结果】以重组禽 痘病毒 为模板，利用 基因特异引物进行 ，扩增出 条约 左右的带。以间接免疫荧光法证实重 ＤＮＡ 犎犃 ＰＣＲ １ １．７ｋｂ 组禽痘病毒能表达 ＨＡ。 结论】成功构建了表达 Ｈ９亚型禽流感病毒 犎犃基因的重组禽痘病毒，且构建的重组禽痘 病毒能表达具有生物学活性的 ＨＡ。 ［关键词］ 亚型禽流感病毒； 基因；重组禽痘病毒；基因工程疫苗 Ｈ 犎犃 　 ９ ［中图分类号］ ［文献标识码］ ［文章编号］ （ ） Ｓ８５１．３１ Ａ １６７１９３８７２００８１２０００７０７ 　 　 　 Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｆｏｗｌｏｘｖｉｒｕｓｅｘｒｅｓｓｉｎ ｈａｅｍａ ｌｕｔｉｎｉｎ ｐ ｐ ｇ ｇｇ ｅｎｅｏｆＨａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ ｇ