河豚毒素dna适配子的制备及应用.pdf

※分析检测 食品科学 2014, Vol.35, No.24 205 河豚毒素DNA适配子的制备及应用 邵碧英，陈 彬，陈文炳，杨 方，缪婷玉，彭 娟 （福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心，福建省检验检疫技术研究重点实验室，福建福州 350001 ） 摘  要：人工合成78 个碱基的随机ssDNA文库，采用指数富集配基的系统进化技术与诱变聚合酶链式反应 （polymerase chain reaction ）结合的方法，通过筛选富集、克隆、测序，获得了与河豚毒素（tetrodotoxin，TTX ） 特异结合的单克隆DNA适配子A3 。DNA适配子A3 的二级结构主要为茎环结构，与TTX 的亲和力为1.254。对适配 子和TTX结合的磷酸盐缓冲液pH值、荧光染料结合时间进行优化，结果表明，最适pH值为7.5 ，最佳结合时间为 －6 10 min。建立的快速筛选检测TTX 的DNA适配子-荧光染料法对TTX 的检出限为10 mo1/L 。 关键词：河豚毒素；适配子；荧光染料；检测 Preparation and Application of Tetrodotoxin DNA Aptamer SHAO Bi-ying, CHEN Bin, CHEN Wen-bing, YANG Fang, MIAO Ting-yu, PENG Juan (Fujian Provincial Key Laboratory of Inspection and Quarantine Technology Research, Center of Inspection and Quarantine Technology, Fujian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fuzhou 350001, China) Abstract: in vitro  The tetrodotoxin (TTX) specific monoclonal DNA aptamer A3  A 78-mer ssDNA library was synthesized . was prepared using systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) combined with mutagenic PCR by  screening,enrichm cloningandsequencing.ThesecondarystructureoftheDNA aptamerA3mainlycontainedstemring   ent,                              struc a t  a fort wa 1.254.T  PBSbuf pH a fluorochrom t  were opt   ture,  nd  he ffinity    etrodotoxin  s    he   fer    nd  e-binding  ime imized. The results showed that the optimum pH was 7.5 and the best binding time was 10 min. As a result, a DNA aptamer- fluorochrome method for rapidly screening and detecting tetrodotoxin was developed with a detection limit of 10-6