牛乳铁蛋白肽衍生物的设计及其在毕赤酵母中表达与 - 现代食品科技.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2017, Vol.33, No.1 牛乳铁蛋白肽衍生物的设计及其在毕赤酵母中表达 与活性分析 王亮 1 1 2 3 1 1 1 1 ，郭爱珍 ，吕自力 ，李晓波 ，钟浩 ，胡曼 ，齐向辉 ，蔡梅红 （1.江苏大学食品与生物工程学院，江苏镇江 212013）（2.成都中医药大学第二附属医院，四川成都 610041） （3.中国科学院新疆理化技术研究所，新疆乌鲁木齐 830011） 摘要：本文利用抗菌肽数据库以及蛋白质分析软件等工具，根据抗菌肽结构与功能的关系，对牛乳铁蛋白肽衍生肽（LfcinBD ） 的结构进行优化设计。将设计得到的LfcinBD 基因片段与 pPIC9K 质粒构建重组表达载体，线性化后电转化毕赤酵母细胞 GS115，利 用甲醇诱导表达。实验对发酵上清液进行了分离纯化和活性测试，SDS电泳检测到了目标蛋白的有效表达。实验还对优化设计 得到的牛乳铁蛋白肽衍生肽与同等发酵条件下产生的天然牛乳铁蛋白肽的抑菌活性进行了对比分析，结果证明该衍生肽对金黄色葡萄 球菌有更强的抑菌活性。研究表明经色氨酸 Trp 替换的牛乳铁蛋白肽中第 10，14 位氨基酸获得的牛乳铁蛋白肽衍生肽具有很好的抑 菌活性，实验为进一步探究牛乳铁蛋白肽衍生肽生物活性的改进奠定了基础。 关键词：LfcinBD 设计；毕赤酵母表达；抗菌活性 文章篇号：1673-9078(2017)1-74-80 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2017.1.012 Design of Bovine Lactoferricin-Derived Peptide and Its Expression and Activity in Pichia pastoris 1 1 2 3 1 1 1 1 WANG Liang , GUO Ai-zhen , LV Zi-li , LI Xiao-bo , ZHONG Hao , HU Man , QI Xiang-hui , CAI Mei-hong (1.School of Food and Biological Engineering, Jiangsu University, Zhenjiang 212013, China) (2.The Second Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610041, China) (3.Xinjiang Technical Institute of Physics and Chemistry, Chinese Academy of Sciences, Urumqi 830011, China) Abstract: Antimicrobial peptide databases and protein analysis software were used to optimize the design of bovine lactoferricin-derived peptide (LfcinBD), based on knowledge of