探讨重组人促红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子联合应用对缺氧 .pdf

中国体外循环杂志２０１２年１２月１５日第１０卷第４期 ＣｈｉｎＪＥＣＣＶｏｌ．１０Ｎｏ．４Ｄｅｃｅｍｂｅｒ１５，２０１２ ２２７ ·基础研究 · 探讨重组人促红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子 联合应用对缺氧心肌细胞保护的分子机制 付振虹，董　蔚，盖鲁粤，薛　浩，陈韵岱 ［摘要］：目的　通过研究促红细胞生成素（ＥＰＯ）联合应用粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）对缺氧心肌细胞的影响，探讨 其对缺氧心肌细胞发挥保护作用可能的分子机制。方法　采用９５％Ｎ ＋５％ＣＯ 气体充分置换的１％胎牛血清ＤＭＥＭ培养 ２ ２ 液培养２４ｈ，建立缺氧心肌细胞模型。将心肌细胞分为５组，对照组、缺氧组、缺氧＋ＥＰＯ组、缺氧＋Ｇ－ＣＳＦ组和缺氧＋ＥＰＯ ＋Ｇ－ＣＳＦ联合给药组。建立缺氧模型２４ｈ后收集５组心肌细胞标本。采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ方法检测各组心肌细胞中的Ｂｃｌ －２、Ｂａｘ、Ｃａｓｐａｓｅ－３ｍＲＮＡ的表达，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ方法检测各组心肌细胞中的Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、细胞色素ｃ（ＣｙｔＣ）、磷酸化信 号转导与转录活化因子３（ｐ－ＳＴＡＴ－３）、Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。结果　成功建立了心肌细胞缺氧模型。与缺氧组相比： ＥＰＯ、Ｇ－ＣＳＦ和联合给药组明显提高缺氧心肌细胞的存活率，减少凋亡率和总死亡率（ ＜０．０１）。与缺氧组相比：ＥＰＯ组和 Ｐ Ｇ－ＣＳＦ组Ｂｃｌ－２表达增加（ ＜０．０１），Ｂａｘ、Ｃａｓｐａｓｅ－３表达减少（ ＜０．０１），联合治疗组作用最明显，强于单独药物治疗 Ｐ Ｐ 组（ ＜０．０１），ＥＰＯ和Ｇ－ＣＳＦ组之间无明显差异（ ＞０．０５）；ＣｙｔＣ表达在ＥＰＯ组、Ｇ－ＣＳＦ组和联合给药组明显降低（ Ｐ Ｐ Ｐ ＜０．０１）；三组之间无明显差异（ ＞０．０５）；Ｐ－ＳＴＡＴ－３蛋白表达在联合给药组明显增高（ ＜０．０１）。结论　ＥＰＯ联合Ｇ－ Ｐ Ｐ ＣＳＦ治疗，可能通过激活线粒体途径和Ｊａｎｕｓ激酶／信号转导和转录激活子（ＪＡＫ／ＳＴＡＴ）途径联合发挥更强的抗凋亡作用。 ［关键词］：　缺氧；心肌细胞；促红细胞生成素；粒细胞集落刺激因子；细胞凋亡；ＪＡＫ／ＳＴＡＴ ［中图分类号］：Ｒ６５４．１　［文献标识码］：　Ａ　　［文章编号］：１６７２－１４０３（２０１２）０４－０２２７－０５ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａ ｔｉｎｇｆａｃｔｏｒｏｎｈｙｐｏｘｉａｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ ＦｕＺｈｅｎ－ｈｏｎｇ，ＤｏｎｇＷｅｉ，ＧａｉＬｕ－ｙｕｅ，ＸｕｅＨａｏ，ＣｈｅｎＹｕｎ－ｄａｉ． ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ＰＬＡＧｅｎｅｒａｌｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，１００８５３，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＤｏｎｇＷｅｉ，Ｅｍａｉｌ：３０１ｄｏｎｇｗ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＥＰＯ）ｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａ ｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ（Ｇ－ＣＳＦ）ｏｎｈｙｐｏｘｉａｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅａｉｒｉｎｔｈｅｃｕｌｔｕｒａｌｍｅｄｉｕｍｗａｓｃｈａｎｇｅｄｂｙ９５％ Ｎ ａｎｄ ２ ５％ ＣＯｆｏ