标准名称 - 黑龙江省畜牧兽医局.doc

ICS65.120 B 46 DB23 黑龙江省地方标准 DB 23/ T1435—2011 饲料中炔诺醚的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of quinestrol in feeds LC-MS/MS method 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 （本稿完成日期：2010.11.21） 2011 - 01- 18发布 2011 - 02 - 18实施 黑龙江省质量技术监督局发布 前言 本标准依据GB/T 1.1的起草规则编写。 本标准由黑龙江省畜牧兽医局提出。 本标准由黑龙江省饲料标准化技术委员会归口。 本标准由哈尔滨工业大学食品科学与工程学院和黑龙江省质量监督检测研究院起草。 本标准主要起草人：井晶、李东刚、马莺、鞠福龙、孙立德、王晓岑、李海梅、张华、杨鑫、董爱军。 饲料中炔诺醚的测定 液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了饲料中炔诺醚（炔雌醚）的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准的检测限为 5 μg/kg、定量下限为10 μg/kg、线性范围为10 μg/kg～5.0 mg/kg，本标准同时用于对炔诺醚的定性确证。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 方法提要 试样经乙腈和水的混合溶液提取，提取液经C18固相萃取柱净化，乙腈洗脱，经浓缩、定容后，采用正己烷萃取，以C18液相色谱柱分离，液相色谱-质谱/质谱多反应监测（MRM）测定，基质匹配标准工作曲线法定量。 试剂和材料 试剂 水：符合GB/T 6682规定的一级水。 乙腈：液相色谱纯。 甲醇：液相色谱纯。 乙腈+水（80+20，体积比）。 乙腈+水（50+50，体积比）。 正己烷：分析纯。 乙酸铵：分析纯。 乙酸铵溶液（10.0 mmol/L）：准确称取0.772 g乙酸铵（4.1.7）于1 L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。 固相萃取柱（SPE）：CNW C18（500 mg/3 mL）或相当者。使用前分别用5 mL 乙腈、5 mL 水预处理，并保持柱体湿润，液体过柱速度为1 mL/min～2 mL/min。 炔诺醚（CAS:152-43-2）：纯度﹥99.0%。 炔诺醚标准储备液（100 mg/L）：准确称取适量炔诺醚标准品，用乙腈溶解配制成100 mg/L标准储备液。 标准中间液（10.0 mg/L）：准确移取标准储备液（4.1.11）2.5 mL，以乙腈+水（80+20）溶液溶解并定容至25 mL，浓度为10.0 mg/L。 基质匹配标准工作液：选取经检测不含炔诺醚的饲料样品依5.1、5.2处理，制得空白基质溶液并以此作为溶液分别配制0.0040 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L、0.50 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L的标准工作液，并根据需要选择不同浓度的基质匹配标准工作液各1.0mL按5.3处理。 仪器设备 液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾（ESI）离子源。 固相萃取装置。 氮气吹干仪。 漩涡混合器。 实验室用样品粉碎机。 离心机：转速不低于4000 r/min。 天平：分度值为0.01 g。 分析天平：分度值为0.1 mg。 试样制备 试样处理 按照GB/T 14699.1采样，依据GB/T 20195选取具有代表性的样品粉碎并过0.35 mm筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。 称取试样2 g（精确至0.01g）于25 mL具塞试管中，准确加入10.0 mL提取液（4.1.4），漩涡混合1 min，超声提取20 min，试样提取液以4000 r/min离心10 min，准确移取2.0 mL上清液，加入1 mL水漩涡混匀作为固相萃取上样液。 SPE净化 将上述固相萃取上样液加载到已预处理的C18固相萃取小柱上，残留溶液以0.5 mL乙腈+水（4.1.5）润洗上样，再以5 mL水淋洗，抽干，以乙腈（4.1.2）洗脱，收集1 mL洗脱液，50 ℃氮气吹干，用1.0 mL乙腈+水（4.1.4）溶解残渣，制得SPE净化液。 正己烷萃取净化 在上述SPE净化液中加入0.5 mL正己烷，剧烈震荡2 min后充分静置分层，吸取下层溶液过0.45μm微孔滤膜后上机测定。 仪器测定 液相色谱条件 色谱柱：Phenomenex Gemini C18，4.6 mm×150 mm，粒径5 μm或其他等效色谱柱