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芝麻主要过敏原油质蛋白的基因克隆和原核表达
2010年3月 中国油料作物学报
2010,32(1):041-045 Chinesejournalofoilcropsciences
芝麻主要过敏原油质蛋白的基因克隆和原核表达
何 凡,邬玉兰,刘志刚
(深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所,广东 深圳518060)
摘要:为克隆黑、白芝麻主要过敏原油质蛋白Oleosins的基因并在原核细胞中对其进行表达,本研究分别提取
黑、白芝麻的总RNA,逆转录合成cDNA,根据序列设计简并引物,扩增芝麻主要过敏原油质蛋白Oleosins基因的完
整开放阅读框,并与pET-28a载体连接,测序鉴定后转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)及用IPTG诱导表达。结果
表明克隆获得黑、白芝麻主要过敏原油质蛋白Oleosins的全长基因约为438bp的开放阅读框(包括终止密码子),
编码145个氨基酸。所编码的蛋白相对分子质量约为15.5kDa,为小分子量蛋白,等电点为5.18,与理论值相符。
序列同源性分析发现其与数据库中已知的黑、白芝麻油质蛋白Oleosins基因同源性很高(GenBank黑、白芝麻油质
蛋白基因登录号分别为EU999158和EU999159),并在DE3中高效表达。
关键词:芝麻;油质蛋白;过敏原;基因克隆;原核表达
中图分类号:Q785 文献标识码:A 文章编号:1007-9084(2010)01-0041-05
GenecloningandprokaryoticexpressionofthemajorallergenOleosinsfromsesameseeds
HEFan,WUYu-lan,LIUZhi-gang
(AllergyandImmunologyInstitute,SchoolofMedicine,ShenzhenUniversity,Shenzhen518060,China)
Abstract:RTPCRmethodwasappliedtoclonethefull-lengthofthemajorallergenoleosinsgenefromsesa
meseeds.ThespecificprimersweredesignedandtheORFofoleosinsfromthesesameseedswasamplifiedand
clonedintotheexpressionvectorpET-28a.TherecombinantoleosinsofsesameseedswasexpressedinE.coli
BL21(DE3).ResultsindicatedthattheclonedcDNAORFsequencecontained438bpencodingfor145aminoacids
sequence.SequenceanalysisshowedthattheencodedproteinhadaMW15.5kDaandpI5.18.TheGenBankac
cessionnumbersofthesecloneswereEU999158andEU999159,whichwerealmostidenticalwitholeosinsgene
fromsesameseeds.Thededucedproteinwasthereforeregardedasthemajorallergenofsesameseeds,whichwill
beusedtofurtherstudysesameseedsrelatedallergy.
Keywords:Sesameseeds;Oleosins;Allergen;Genecloning;Prokaryoticexpression
变态反应性疾病被世界卫生组织(WHO)认为 品过敏的研究和防治,如美国国会最近通过了食品
是当前世界性的重大卫生学问题,它包括外源性哮 变应原标签和消费者保护法,其中明确规定食品标
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