芝麻主要过敏原油质蛋白的基因克隆和原核表达.pdf

２０１０年３月 中国油料作物学报 ２０１０，３２（１）：０４１－０４５ Ｃｈｉｎｅｓｅｊｏｕｒｎａｌｏｆｏｉｌｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅｓ 芝麻主要过敏原油质蛋白的基因克隆和原核表达 何　凡，邬玉兰，刘志刚 （深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所，广东 深圳５１８０６０） 　　摘要：为克隆黑、白芝麻主要过敏原油质蛋白Ｏｌｅｏｓｉｎｓ的基因并在原核细胞中对其进行表达，本研究分别提取 黑、白芝麻的总ＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ，根据序列设计简并引物，扩增芝麻主要过敏原油质蛋白Ｏｌｅｏｓｉｎｓ基因的完 整开放阅读框，并与ｐＥＴ－２８ａ载体连接，测序鉴定后转化大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）及用ＩＰＴＧ诱导表达。结果 表明克隆获得黑、白芝麻主要过敏原油质蛋白Ｏｌｅｏｓｉｎｓ的全长基因约为４３８ｂｐ的开放阅读框（包括终止密码子）， 编码１４５个氨基酸。所编码的蛋白相对分子质量约为１５．５ｋＤａ，为小分子量蛋白，等电点为５．１８，与理论值相符。 序列同源性分析发现其与数据库中已知的黑、白芝麻油质蛋白Ｏｌｅｏｓｉｎｓ基因同源性很高（ＧｅｎＢａｎｋ黑、白芝麻油质 蛋白基因登录号分别为ＥＵ９９９１５８和ＥＵ９９９１５９），并在ＤＥ３中高效表达。 关键词：芝麻；油质蛋白；过敏原；基因克隆；原核表达 中图分类号：Ｑ７８５　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１０）０１－００４１－０５ ＧｅｎｅｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｍａｊｏｒａｌｌｅｒｇｅｎＯｌｅｏｓｉｎｓｆｒｏｍｓｅｓａｍｅｓｅｅｄｓ  ＨＥＦａｎ，ＷＵＹｕ－ｌａｎ，ＬＩＵＺｈｉ－ｇａｎｇ （ＡｌｌｅｒｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｈｅｎｚｈｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ５１８０６０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＲＴＰＣＲｍｅｔｈｏｄｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｃｌｏｎｅｔｈｅｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈｏｆｔｈｅｍａｊｏｒａｌｌｅｒｇｅｎｏｌｅｏｓｉｎｓｇｅｎｅｆｒｏｍｓｅｓａ ｍｅｓｅｅｄｓ．ＴｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｄｔｈｅＯＲＦｏｆｏｌｅｏｓｉｎｓｆｒｏｍｔｈｅｓｅｓａｍｅｓｅｅｄｓｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄａｎｄ ｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ－２８ａ．ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｏｌｅｏｓｉｎｓｏｆｓｅｓａｍｅｓｅｅｄｓｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）．ＲｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｌｏｎｅｄｃＤＮＡＯＲＦｓｅｑｕｅｎｃｅｃｏｎｔａｉｎｅｄ４３８ｂｐｅｎｃｏｄｉｎｇｆｏｒ１４５ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ．ＳｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｎｃｏｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎｈａｄａＭＷ１５．５ｋＤａａｎｄｐＩ５．１８．ＴｈｅＧｅｎＢａｎｋａｃ ｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒｓｏｆｔｈｅｓｅｃｌｏｎｅｓｗｅｒｅＥＵ９９９１５８ａｎｄＥＵ９９９１５９，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅａｌｍｏｓｔｉｄｅｎｔｉｃａｌｗｉｔｈｏｌｅｏｓｉｎｓｇｅｎｅ ｆｒｏｍｓｅｓａｍｅｓｅｅｄｓ．Ｔｈｅｄｅｄｕｃｅｄｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｔｈｅｒｅｆｏｒｅｒｅｇａｒｄｅｄａｓｔｈｅｍａｊｏｒａｌｌｅｒｇｅｎｏｆｓｅｓａｍｅｓｅｅｄｓ，ｗｈｉｃｈｗｉｌｌ ｂｅｕｓｅｄｔｏｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｓｅｓａｍｅｓｅｅｄｓｒｅｌａｔｅｄａｌｌｅｒｇｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｅｓａｍｅｓｅｅｄｓ；Ｏｌｅｏｓｉｎｓ；Ａｌｌｅｒｇｅｎ；Ｇｅｎｅｃｌｏｎｉｎｇ；Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ 　　变态反应性疾病被世界卫生组织（ＷＨＯ）认为 品过敏的研究和防治，如美国国会最近通过了食品 是当前世界性的重大卫生学问题，它包括外源性哮 变应原标签和消费者保护法，其中明确规定食品标