二烯丙基二硫对人白血病kg1-α细胞增殖的影响 - tumor - 肿瘤.pdf

肿瘤2014 年8 月第34 卷第8 期　TUM OR Vol. 34, August 2014　　 691 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2014.08.003 Copyright© 2014 by TUM OR Basic Research 基础研究 · 二烯丙基二硫对人 白血病KG 1-α细胞增殖的影响 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 罗　念 ，陈地龙 ，左国伟 ，夏　菁 ，游智梅 ，李丹阳，冯子强 ，石庆强 ，赵绿翠 ，李　静 1. 重庆医科大学组织学与胚胎学教研室，干细胞与组织工程研究室，重庆　400016 ；2 . 重庆医科大学临床检验诊 断学省部共建教育部重点实验室，重庆　400016 [ 摘要 ]　目的：探讨二烯丙基二硫 （diallyl disulfide ，DADS ）对人白血病细胞系KG1-α增殖的抑制作用及其对丙 酮酸激酶M2 （pyruvate kinase M2 ，PKM2 ）的影响。方法：首先采用蛋白质印迹法筛选PKM2 高表达的白血病 细胞株；CCK-8 （cell counting kit-8 ）法检测不同浓度的DADS （50 ～400 μmol/L ）作用24 、48 和72 h 后，对 高表达PKM2 的白血病细胞株KG1-α增殖的影响；FCM 法检测对KG1-α细胞周期的影响，Hochest 33258 染法 色观察对KG1-α细胞凋亡形态学的影响；蛋白质印迹法检测PKM2 、PIN1、细胞周期蛋白D1 以及p2 1 蛋白的表达； 免疫荧光法检测PKM2 在细胞质及细胞核中的分布情况。结果：PKM2 在KG1-α细胞中高表达；CCK-8 结果显 示，DADS 在50 ～400 μmol/L 浓度范围内对KG1-α细胞均有明显的抑制作用；FCM 法检测结果显示，DADS （50 和100 μmol/L ）作用48 h 后，药物组中G0/G1 期细胞所占的比例明显增加；Hochest 33258 染色结果显示， DADS 诱导后KG1-α细胞呈现典型的凋亡形态学改变；DADS 作用8 h 后，蛋白质印迹法和免疫荧光检测结果均 显示，PKM2 蛋白在细胞核中的表达水平呈下调趋势；PIN1 蛋白的表达水平下调；DADS 作用48 h 后，KG1-α细 胞中细胞周期蛋白D1 的表达水平下调，而p2 1 蛋白的表达水平上调 （ α P 均＜0.05 ）。结论：DADS 对KG1- 细 胞增殖抑制的机制可能与下调PKM2 的表达，并使其细胞周期阻滞在G0/G1 期有关。 [ 关键词 ]　白血病；二烯丙基二硫；丙酮酸激酶；细胞周期；细胞凋亡 [中图分类号]　R733.7 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431 (2014) 08-0691-08 Proliferation inhibition of human leukemia KG1-α cells induced by diallyl disulfide 1 1 2 1 1 1 1 LUO Nian , CHEN Di-long , ZUO Guo-wei , XIA Jing , YOU Zhi-mei , LI Dan-ya