dna复合物处方工艺优化及体外转染效率 - 《中国药科大学学报》！.pdf

学 报 ４０ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１０，４１（１）：４０－４４ 聚乙烯亚胺／ＤＮＡ复合物处方工艺优化及体外转染效率  李飞燕，周建平 ，吴向明，关丽叶，邓祖媛，谢　芳 （中国药科大学药剂学教研室，南京２１０００９） 摘　要　目的：考察聚乙烯亚胺（ＰＥＩ）相对分子质量、氮磷比（Ｎ／Ｐ比）、溶剂、离子强度等对ＰＥＩ／ＤＮＡ复合物形成、表面 性质以及细胞转染效率的影响。方法：制备不同相对分子质量ＰＥＩ／ＤＮＡ复合物，通过凝胶电泳和紫外吸收检测确定ＰＥＩ与 ＤＮＡ的复合能力（Ｎ／Ｐ比），测定不同溶剂、离子强度下的粒径和Ｚｅｔａ电位，考察复合物在ＨｅｐＧ２细胞中的转染情况。结果： ＰＥＩ与ＤＮＡ的复合能力与ＰＥＩ的相对分子质量呈正相关，不同溶剂、离子强度会影响复合物的表面性质，以磷酸盐缓冲液 （ＰＢＳ）为溶剂、ＰＥＩ（２５ｋＤ）为载体、Ｎ／Ｐ比为１２～１５时，ＰＥＩ／ＤＮＡ复合物细胞转染效率明显优于质粒ＤＮＡ，仅略低于阳性对 照组。结论：经优化的ＰＥＩ／ＤＮＡ复合物可显著提高ＤＮＡ在细胞中的转染效率。 关键词　聚乙烯亚胺；ＤＮＡ复合物；工艺优化；细胞转染 中图分类号　Ｒ９４４　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１０）０１－００４０－０５ Ｆｏｒｍｕｌａｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ／ＤＮＡ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ＬＩＦｅｉｙａｎ牞ＺＨＯＵＪｉａｎｐｉｎｇ牞ＷＵＸｉａｎｇｍｉｎｇ牞ＧＵＡＮＬｉｙｅ牞ＤＥＮＧＺｕｙｕａｎ牞ＸＩＥＦａｎｇ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｉｍ牶Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｏｌｅｃｕｌｅｗｅｉｇｈｔ牞ｔｈｅＮ／Ｐｒａｔｉｏ牞ｓｏｌｖｅｎｔａｎｄｉｏｎｉｃｓｔｒｅｎｇｔｈｏｎｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄｓｕｒｆａｃｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＰＥＩ／ＤＮＡｃｏｍｐｌｅｘｅｓ牞ａｎｄｓｔｕｄｙｉｔｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙＭｅｔｈｏｄｓ牶ＴｈｅＮ／Ｐｒａｔｉｏｏｆｔｈｅ ｐｒｅｐａｒｅｄＰＥＩ／ＤＮＡｃｏｍｐｌｅｘｅｓｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄｕｓｉｎｇｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎｄＵＶｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｓｓａｙＴｈｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅ ａｎｄｓｕｒｆａｃｅｃｈａｒｇｅｏｆｔｈｅｃｏｍｐｌｅｘｅｓｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｌｖｅｎｔｓａｎｄｉｏｎｉｃｓｔｒｅｎｇｔｈＴｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉ ｃｉｅｎｃｙｉｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄＲｅｓｕｌｔｓ牶ＴｈｅｒｅｗａｓａｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆＰＥＩａｎｄ ＤＮＡａｎｄｍｏｌｅｃｕｌｅｗｅｉｇｈｔｏｆＰＥＩＩｎａｄｄｉｔｉｏｎ牞ｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＰＥＩ／ＤＮＡｃｏｍｐｌｅｘｅｓｗｅｒｅａｌｓｏｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙｔｈｅｓｏｌｖｅｎｔｓａｎｄｉｏｎｉｃｓｔｒｅｎｇｔｈＣｏｍｐａｒａｂｌｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓｉｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｆｏｒｔｈｅＬｉｐｏ ｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００／ＤＮＡａｎｄｔｈｅｐｒｅｐａｒｅｄＰＥＩ牗２５ｋＤ牘／ＤＮＡｃｏｍｐｌｅｘｅｓｉｎＰＢＳａｔｔｈｅＮ／Ｐｒａｔｉｏｏｆ１２１５牞ｗｈｉｃｈｗａｓ ｍｕｃｈｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｎａｋｅｄＤＮＡＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ牶ＴｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄＰＥＩ／ＤＮＡｃｏｍｐｌｅｘｅｓｃｏｕｌｄｅｆｆｅｃｉｅｎｔｌｙｔｒａｎｓｆｅｃｔ ｔｈｅｃｅｌｌｓｉｎｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｔｏｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ牷ＤＮＡｃｏｍｐｌｅｘｅｓ牷ｆｏｒｍｕｌａｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ牷ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉ