家畜传染病学实验指导：新城疫弱毒疫苗的制造和免疫接种 免费.docVIP

实验三十 新城疫弱毒疫苗的制造和免疫接种 目 的 1．掌握新城疫弱毒疫苗的制造程序和方法(在实际防疫中不能随意自制疫苗)。 2．掌握新城疫弱毒疫苗的使用方法和注意事项。 内容及方法 在新城疫防制措施中，应用疫苗对鸡免疫接种是控制和消灭新城疫行之有效的办法。但是疫苗质量和正确使用方法是关系到新城疫免疫成败的一个重要问题，所以对疫苗的制造和检验应该熟悉和掌握。现就新城疫I系弱毒疫苗的制造程序和方法和免疫接种介绍如下。 新城疫I系弱毒疫苗的制造 1．毒种 I系苗毒种由中国兽药监察所负责鉴定、保管和供给。对毒种的继代和保存 按该毒种所规定标准和方法做。 2．湿苗的制造方法 选择健康种鸡场的种鸡所产新鲜种套、将种蛋清洗消毒后，置 38.5～39℃，相对湿度在60％一70％孵化9～10天。接种前应挑选活力强的鸡胚，并划好 气室和接种部位。以无菌手术将毒种作1：100稀释，接种9～11日龄鸡腔尿囊腔内，每胚 0.1ml，封闭接种孔后，置37℃孵卵箱内继续孵化，并每日照蛋2次。鸡胚应于接种后24～48h内死亡(一般多在36h前后死亡)。将死亡鸠胚即取出，气室向上，置4～8℃冰箱冷却4～24h后取出，将气室部位用5％磺酒消毒，然后以无菌剥除气室部位的蛋壳，揭去蛋壳膜，剪破绒毛尿囊膜及羊膜，吸出胚液，若干胚的胚液混合为一组，置于灭菌瓶中，逐瓶进行无菌检验。即每瓶抽疫苗0.2ml分别接种于鲜血斜面和熟肉基内，在37℃培养72h应无菌生长，然后将无菌生长的疫苗混合，每毫升胚液加入青霉素500单位和链霉素500μg，并分装小瓶内，注明疫苗名称、批号及生产日期，放在一10～一15℃冰箱内，待检验合格后方可使用。 3．疫苗检验 每批疫苗制好后，必须进行下列几项检验，均合格者方可供预防免疫接种。 (1)无菌检验 每批疫苗任抽5瓶作为样品，供作无菌检验，方法同上，应无细菌生 长。在做细菌培养的同时，亦可注射小鼠若干只，每只皮下注射0.2ml，观察10天应全部 健活。若有细菌生长或小鼠死亡者，此苗废弃。 (2)安全检查 用4～12月龄未经鸡新城疫疫苗免疫过的健康鸡3只，每只鸡肌肉注 射100倍稀释疫苗lml，观察10～14天，应无任何反应，或有轻度反应，且在14天内恢复， 认为合格。如有重反应不能复原时，应重检一次。 (3)效力检验 每批疫苗抽样一瓶，用无菌生理盐水将疫苗按含毒量稀释成10-5，接 种10日龄鸡胚5个，每胚尿囊腔接种0．1ml，鸡胚应在24～72时全部死亡，胚胎有明显病变。混合鸡胚液对1％鸡红细胞的凝集价在1：80以上者为合格。如不能在规定时间内致死全部鸡胚时，可重检一次。其次选取4～12月龄未经新城疫疫苗免疫过的健康鸡若干只，分为两组，一组为试验组，一组为对照组。试验组每只鸡以100000倍稀释的疫苗肌肉注射 lml，或将疫苗作1000倍稀释用钢笔尖醮取疫苗皮下刺种两次，观察10～14天后与对照组 鸡用新城疫强毒攻击，其剂量为每只鸡肌肉注射000倍稀释的鸡胚液强毒lml，观察10～ 14天，试验组鸡应全部健活，而对照组鸡应全部发病，至少有2／3死亡方可合格。若对照 照组鸡不能全部发病，或虽全部发病而死亡少于2／3时，应重检一次。如试验组鸡发病或 死亡时，这批疫苗为无效，予以废弃。 4、疫苗的保存 自鸡胚液收获日期算起，一15℃保存不超过一年；0～4℃保存不超过 2个月；15～20℃不超过14天。疫苗运输中应有冷藏设备。 二、新城疫的免疫接种 目前我国用于新城疫预防接种的疫苗有三种类型。是中等毒力的活苗(1系苗)，这种 疫苗对雏鸡反应较大，只适用1个半月龄以上鸡，产生免疫较快，免疫期较长，多数用于 加强免疫；其次是弱毒力的活苗，有I系苗(HBl株)。Ⅳ系苗(Lasota株)，对雏鸡无反应，免疫期较短多用作雏鸡的基础免疫；第三类是灭活油乳剂苗，产生免疫力较慢。而免疫期 长，如与弱毒活苗联合使用，可加强其免疫力和延长其免疫期，多用于加强免疫。关于各 类疫苗使用方法见说明书。在进行新城疫的免疫接种时，应注意的事项。 1．制定合理的免疫程序 鸡群的免疫状况会影响到新城疫疫苗接种后的免疫应答，如 雏鸡的母源抗体高时，对弱毒疫苗免疫接种受到影响，不能产生好的免疫应答。所以大型 鸡场和一般养鸡场应建立免疫监测制度，根据鸡群HI抗体水平确定该鸡场新城疫的免疫 程序。例如初生雏鸡HI抗体在4log2以下应进行首次免疫，免疫后每间隔15或20天采血 分离血清测定HI抗体，一方面可以了解免疫鸡HI抗体消长情况，另一方面确定