家畜传染病学实验指导：牛白血病的诊断.docVIP

实验二十四 牛白血病的诊断 目 的 初步掌握本病的临诊诊断、，实验室诊断和琼脂凝胶免疫扩散试验。 内容及方法 一、临诊诊断 本病诊断方法有多种，迄今公认血液学诊断仍是一种较普遍而实用的诊断方法，血液学诊断法进展较快，而且此法能作为早期诊断。 1．流行病学 患牛和带毒牛是本病的传染源。被感染的牛大多数为无症状终身带毒 者。健康牛群的发病，多由于引进感染种畜所致，但一般要经过数年(平均4年)才出现肿瘤病例。本病既可通过垂直传播又可通过水平传播。胎内感染和吃病牛初乳而感染，说明垂直传播的重要意义。牛与牛接触通过气源传播。实验证明吸血昆虫(蛆、蜱、蝙蝠等)对传播本病起重要作用。输血、接种疫苗、外科手术(去势、断尾、断角、剪耳号等)均可传递病毒引起感染。也在公牛精液中发现病毒，因此交配感染是可能的。在自然条件下只感染牛，以4～8岁牛发病最多，3岁以下牛多为散发。将人工培养的病毒接种初生绵羊和犊牛都能感染发病。用于本病毒人工感染的试验动物除绵羊外，尚有山羊、猪、鹿、猕猴、黑猩猩、家兔、蝙蝠、猫和犬。绵羊对本病毒高度敏感，且比牛易形成淋巴肉瘤，是牛白血病病毒感染试验的理想模型。不同品种牛对本病似有易感性，但奶牛的感染率高于其他牛。本病的发生率随年龄增长而呈上升的趋势。据报道本病的发生具有家族史，还认为牛白血病病毒感染的反应主要根据宿主的遗传因素。据国内调查研究证明，我国黑白花奶牛对牛白血病病毒感染，持续性淋巴细胞增生及淋巴肉瘤的发生都有家族史，并提出了多因子遗传的观点。因此病毒、环境因素和遗传因素都应得到同样重视。 2．病状 临诊上明显的症状是全身体表淋巴结(如腮、肩前、股前淋巴结等)显著肿大而且坚硬。直肠检查发现腹股沟和髂淋巴结肿大，以及内脏器官有肿瘤肿块，具有特别的诊断意义。经常可发现眶后淋巴结肿大，挤压眼球，使眼球突出。本病的临床类型可分为下列4型。 (1)成年型 多见于2岁以下的奶牛，呈地方流行性，病牛产奶量下降，食欲减退或废绝，消瘦，体表淋巴结肿大，腹泻。有的眼球突出。后期常发生后驱麻痹或瘫痪，吸呼困难，尿不畅，心脏机能障碍。孕牛有的发生流产。 (2)犊牛型(或幼牛型) 6月龄以内的犊牛，呈散发，病犊表现全身性淋巴结肿大、恶病质，心音不整。还发生B细胞免疫缺乏。 (3)胸腺型(或青年期型) 主要发生于6～18月龄的肉用牛。特征症状为肿瘤体从颈腹侧部一直延伸至胸腔，由于肿瘤压迫呼吸道而表现呼吸困难；肿瘤压迫食道可使嗳气受阻，导致瘤胃臌气。 (4)皮肤型 散发于3岁以上的牛。病牛皮肤出现许多疹块样的病变，后来逐渐形成溃疡或坏死。 3．病变 病理学诊断意义较大，通过尸体剖检，病理组织学切片检查，可得出本病的正确结论。尸体剖检的特征有肿瘤病变。一般认为牛白血病98％属肿瘤型，几乎都是淋巴 细胞型或成淋巴细胞型。体表淋巴结肿大、灰色、切面突起。内脏器官(心、真胃、肝、脾等)有肿瘤结节，其大小差异很大。有的病牛胸腺发生肿瘤。也有淋巴结呈对称性肿大，但无肿瘤形成。少数病牛只有真皮发生结节状白细胞浸润，在病后期出现淋巴结肿大和内脏 肿瘤。组织学检查发现，肿瘤中含有致密基质和两种细胞，一种为淋巴细胞(直径8～10μm)，另一种为成淋巴细胞(直径12～15μm)，并常见到核分型现象。电镜观察肿瘤细胞， 见到核小囊。 二、实验室诊断 (一)病原学检查 1．病料采取 生前血液检查可采取新鲜血液(抗凝)。检测血清中特异抗体采取新鲜血 液，分离血清。进行病理组织学检查可采取活体组织或肿瘤组织。制作切片标本，可采取的组织包括淋巴结、心耳、肝、脾、肾、胸腺等。 2．直接镜检 将BLV感染牛的淋巴细胞在37℃培养48～72h后，制作超薄切片标本，在电镜下，从细胞的空泡内和细胞膜上发现有很多游离的和正在出芽的乙型病毒颗粒。病毒颗粒多为球形，少数呈棒状，大小不一，平均直径约为100nm(90～120nm)，外有双层囊膜，囊膜表面有长10～15nm的微细纤突，衣壳直径40～90nm。其核酸型为单股RNA。 3．分离培养 BLV能感染牛、绵羊、山羊、人、猿、犬和蝙蝠等哺乳动物的细胞。这 些细胞有些为成纤维细胞(如BLJ—5)，有些为上皮样细胞(如LFK)，有些为淋巴样细胞(如NBC)。进行细胞培养时，通常须将感染牛的血液淋巴细胞与刚长成单层的上述任何一种细胞共同培养，单层细胞被感染后即形成持续性感染。大多数种类的细胞不表现细胞病变，能释放出完整的病毒颗粒，释放量可能很多。作细胞培养时对感染牛的血液淋巴细胞须经48～72h的短期培养，并在培养液中加入植物血凝素(PHA)。 4．诱发合胞体试验(SIA) 将病牛淋巴细胞与代谢旺盛的指示细胞(如人双