苏云金芽胞杆菌hd-73菌株sigl基因突变体的特性分析 - 生物谷.doc

ISSN 0001-6209; CN11-1995/Q 苏云金芽胞杆菌HD-73菌株sigL基因突变体的特性分析 彭琦1, 2，朱莉2，宋福平2*，张杰2，高继国1，黄大昉3 (1东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030) （2中00193） （3中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081摘要：sigL基因突变体的特征，进一步明确sigL基因在苏云金芽胞杆菌中的功能。【方法】测定了苏云金芽胞杆菌HD-73菌株，sigL基因缺失突变菌株和互补菌株在不同营养成分的培养基中的生长曲线以及在不同氮源条件下的生长情况。分别将调控aco操纵子（编码3-羟基丁酮脱氢酶系统）的转录调节基因acoR和调控bkd操纵子（编码催化支链脂肪酸合成的酶系统）的转录调节基因bkdR的启动子与lacZ基因融合，并转入出发菌株和sigL突变体中，测定?-半乳糖苷酶的活性。【结果】sigL突变体不能利用精氨酸、脯氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸为唯一的氮源；?-半乳糖苷酶的活性分析表明：在sigL突变体中acoR基因和bkdR基因的启动子活性降低。序列比对分析表明：Bt中的AcoR和BkdR的蛋白结构域与依赖于?L的转录调节因子的保守序列相似。【结论】苏云金芽胞杆菌中sigL基因的缺失可能阻碍了某些重要碳、氮源参与的代谢途径。在Bt中AcoR和BkdR是依赖于?L的转录调节因子。 关键词：苏云金芽胞杆菌；sigL基因突变体；代谢途径；转录调节因子AcoR、BkdR 中图分类号：Q939 文献标识码：A 文章编号：0001-6209 (2008) 09-1147-07 sigL基因编码的产物?L是细菌中许多重要代谢途径的转录因子。?L属于?54家族[1]，Reitzer等[2]发现在大肠杆菌中?L调控许多基因的表达，尤其是与氮代谢相关的基因。Arous等[3]利用基因芯片技术发现，在单核细胞增多性李司忒菌（Listeria monocytogenes）中，?L调控77个基因的表达，其中16个与碳水化合物的代谢有关，10个与氨基酸的代谢有关，51个涉及了其它的生理功能。在枯草芽胞杆菌中，已经鉴定出5种依赖于?L的转录调节因子，分别是：调控果聚糖酶操纵子的转录调节因子（LevR）、调控精氨酸代谢途径的转录调节因子（RocR）、调控3-羟基丁酮分解代谢途径的转录调节因子（AcoR）、调控支链脂肪酸合成途径的转录调节因子（BkdR）和调控与细胞抵御冷刺激相关途径的转录调节因子（YplP），这些转录调节因子在许多生理代谢途径中起着重要作 用[4~8]，其中AcoR和BkdR两个转录调节因子分别正调控aco操纵子和bkd操纵子，这两个操纵子同时受?L的正调控。 苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）区别于其它芽胞杆菌的显著特征是能在芽胞形成期产生具有杀虫作用的蛋白晶体[9]，Cry蛋白从开始表达到晶体和芽胞的最终成熟涉及很多的物质和能量代谢，包括氨基酸代谢、多糖和脂类的代谢等等；与枯草芽胞杆菌相比，在苏云金芽胞杆菌晶体和芽胞形成过程中，与代谢相关的酶的合成和活性调节可能存在更为精细的方式[10]。Bt菌株在形成芽胞的同时合成大量的晶体蛋白，跟碳、氮代谢调节有密切关系，Yousten等[10]报道Bt在葡萄糖培养基中产生的乙酸等次级代谢产物在芽胞形成早期可以被再利用；Nickerson[11]等报道脂类的代谢在Bt的生长、芽胞的形成和萌发过程中有重要的作用；而SigL在Bt中的功能及其调控的代谢途径至今未见正式报道。因此研究SigL的功能有助于了解苏云金芽胞杆菌的发育中能量和物质代谢调节机制，揭示该σ因子在晶体形成等生理生化过程中的功能和作用。 本研究在获得苏云金芽胞杆菌HD-73菌株sigL基因缺失突变菌株（插入失活突变体，具有卡那霉素抗性）和互补菌株（含有sigL基因及其自身启动子的穿梭载体在sigL突变体中过表达）的基础上（另文发表），测定了突变菌株和互补菌株在不同营养成分的培养基中的生长曲线以及对不同氮源的利用情况；进一步分析了AcoR和BkdR两个转录调节因子在突变体中的活性。为深入研究sigL调控的代谢途径奠定了基础。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 菌株、质粒和培养基：表1为本研究所用菌株和质粒。大肠杆菌（Eschrichia coli）的培养采用LB培养基；苏云金芽胞杆菌的培养分别采用牛肉膏蛋白胨培养基（3%牛肉膏，5%蛋白胨，pH 7.2 表1 菌株和质粒 Table 1 Strains and plasmids Strains and plasmids Relevant characteristic Resource Strains Esch