2 尿中蛋白检测定试纸法.ppt

兽医内科学实验 尿液检测 尿液检测 常用检验项目包括用物理学方法，检查其物理性状，如尿色、透明度、气味、比重等；以化学方法，测定其反应、蛋白质、酮体及潜血；以及用显微镜检查尿沉渣。 一 尿液标本的采集和保存 可用清洁容器或集尿器搜集自然排出的尿液，必要时也可用导尿方法采取。采集的尿液标本应立即检验，如不能立即检验时，可加入少量防腐剂，如于l00ml供检尿中，加入福尔马林3～4滴或麝香草酚0.1g。 二 尿液物理性质的测定 尿液物理性质的检查包括尿色、透明度、气味、密度等。 尿密度可用尿密度计测量。 【方法】将尿液沿玻筒壁缓缓倒入特制的尿密度筒内，液面须离筒口约1/30m左右，然后将尿密度计小心地放入盛尿的量筒中，待密度计稳定后，自液面读取密度计的相应刻度数，即为测得的尿密度。若尿量太少不便测量时，可将尿液用常水等量或数倍量稀释后测定，然后将测得的密度值的最后两位数乘以稀释倍数，即得尿液的真实密度。 尿密度计上的刻度，是以尿温15℃为标准而制定的。故当尿温每高于标准温度3℃时，密度应增加0.001；反之，每低3℃时，应减0.001。 【正常值】健康家畜尿密度变动范围如下： 猪：1.018～1.022 马：1.025～1.055 牛：1.025～1.050 羊：1.015～1.070 健康家畜尿液密度的大小，与尿中固体物质的含量成正比，其中影响最大的是尿素和氯化钠。一般尿比重值与排尿量呈反比。尿密度降低，可见于引起尿量增多的各种疾病；尿比重升高，多见于引起尿量减少的各种疾病。 三 尿液的化学检测 1.尿的pH 【方法】最简便的方法是用pH试纸，一端蘸取少许尿液，然后与所附有的标准比色纸进行比色，其相应的数值即为供检尿的pH。 【尿液的反应及其病理变化】草食动物正常为碱性，马尿的pH约为7.8，牛尿则约为8.7左右；而猪尿喂富蛋白质饲料时呈酸性反应；喂给植物性饲料时呈碱性反应。 草食动物尿呈酸性反应，可见于高热性疾病、佝偻病、骨软症及长期饥饿；其碱性增高多由于膀胱炎、尿道阻塞而引起尿液的氨发酵所致。 2 尿蛋白测定 磺柳酸法（磺酸水杨酸法） 【原理】磺柳酸为生物碱试剂，在酸性环境中，其阴性离子可与阳性电荷的蛋白质结合成不溶性的蛋白盐而沉淀。 【试剂】通常用20％磺柳酸溶液。在马也可用10％的磺柳酸溶液。 【方法】取滤过尿5m1于试管内，加20％磺柳酸溶液数滴，如尿中含有蛋白质或蛋白脎，即出现白色混浊或沉淀。由蛋白脎产生的混浊，于加热后可消失，放冷后重复出现。蛋白质沉淀加热也不消失。 2 尿中蛋白检测定 试纸法 【原理】根据指示剂的“蛋白质误差”的原理。 2 尿中蛋白检测定 【方法】由试纸瓶中取出试纸条（取后立即扭紧瓶盖以防瓶内试纸受潮），将试纸插入新鲜的未经离心的尿液中，立即取出与比色板比色。 【临床意义】当喂饲大量蛋白饲料或妊娠动物、新生幼畜等可呈现一时性蛋白尿。病理性蛋白尿主要见于急性肾炎及肾病；膀胱、尿道的炎症时亦可出现轻微的蛋白尿。多数的急性热性传染病（猪瘟、猪丹毒、多种动物的流感、马腺疫、胸疫），某些饲料中毒时，也可出现蛋白尿。 3.尿中潜血的检验 联苯胺法 【原理】血红蛋白中的铁，具有过氧化酶的作用，可分解过氧化氢放出氧，使联苯胺氧化呈绿色或蓝色。 3.尿中潜血的检验 【试剂】联苯胺冰醋酸饱和液，3％过氧化氢溶液。 【方法】取供检尿3～5ml置洁净试管中煮沸，以破坏其他可能存在的过氧化酶。冷却后加入联苯胺冰醋酸饱和液数滴，再加3％过氧化氢溶液数滴混合，数秒钟即可呈现反应。 取滤纸一小片（滤纸应先试验，需不呈阳性反应者方可应用），滴加醚提出液数滴。待醚蒸发后，再滴加联苯胺冰醋酸饱和液数滴，稍待片刻，再滴加3%过氧化氢数滴即可。 【结果判定】若供检尿（或按上述处理后的滤纸）呈绿色或蓝色，为阳性反应。颜色的深度（绿、蓝绿、蓝色、深蓝），可表示反应的强弱（+、++、+++、++++）。若5min后仍不变色，则为阴性反应。 【注意事项】 过氧化氢必须新鲜。 玻璃器材必须十分清洁，否则可呈假阳性反应。 血尿和血红蛋白尿的鉴别 4 尿中酮体检测 （1）郎（Lange）氏法 【原理】丙酮或乙酰乙酸与亚硝基铁氰化钠作用后，再与氨液接触可产生紫红色化合物，冰醋酸可抑制肌酐产生类似的反应。 【试剂】 亚硝基铁氰化钠、冰醋酸、浓氨水（28％） 【方法】取被检尿约2ml于小试管内，加入亚硝基铁氰化钠结晶数小粒，振荡使其溶解，再加冰醋酸0.2ml（3～4滴），混匀后，将试管倾斜，沿管壁缓缓加入浓氨水0.5～lml，在两液交界处呈现紫红色环即为阳性。判定结果时根据颜色产生的时间，可作粗定量判