单克隆抗体及其高聚体的体积排阻色谱分析方法开发 - waters.pdf

[ 应用纪要 ] 单克隆抗体及其高聚体的体积排阻色谱分析方法开发 Paula Hong和Kenneth J. Fountain 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市枫树街34号) 应用优势 简介 ■ 稳定分析mAb单体和聚集体 自生物类似药问世以来，其中存在的蛋白质聚集体就一直是影响其安 1 全性和疗效的一大阻碍 。因此，在生物治疗药物的整个生产过程中， ■ 高通量SEC分离 我们通常都会对蛋白质聚集体进行监测。尽管现在已有多种分析技术 ■ 一致的纯度曲线 可用于分析可溶性聚集体，但一直以来占主导地位的都是体积排阻色 2 ■ 高级聚集体的可重现定量分析 谱(SEC) 。 ■ 简单的SEC方法开发 SEC采用的是二醇基涂层的硅胶色谱柱和HPLC仪器，引入UPLC® 或结合亚 2 m颗粒的低扩散系统后，其等度分离效果已经得到了进一步的改善， 3 能够实现更高的分离度、分析通量以及分析的灵敏度 。但是，就像所 有SEC方法一样，我们还可通过调整该方法所涉及的多个参数来改善分 离效果和提高方法稳定性。以下应用，我们将研究其中几个参数对SEC 分离的影响，包括流动相组成、流速以及色谱柱长度。该应用中对分 离效果的评估基于色谱柱校准、分离度以及聚集体定量等多个标准。 沃特世解决方案 ■ ACQUITY UPLC® H-Class Bio 系统 ■ ACQUITY UPLC BEH200 SEC 1.7 µm色谱柱 ■ Auto•Blend Plus™ 技术 ■ Empower® 2 软件 关键词 体积排阻色谱，UPLC，单克隆抗体， 方法开发，聚集体 1 [ 应用纪要 ] 实验 结果与讨论 进行SEC方法开发时需对多个因素进行评估。理想情况下，SEC分离基 样品描述 于溶液中蛋白质的尺寸大小。鉴于此，我们对水相条件下原始状态的 本实验所用的蛋白质标准品(BioRad， 生物分子进行了体积排阻色谱分析。然而，混合模式的相互作用会对 溶解于去离子水中)含牛甲状腺球蛋白 4 蛋白质尺寸的测定产生影响 。具体而言，填充材料上带电荷的位点会 (5 mg/mL)、牛γ-球蛋白(5 mg/mL)、鸡卵清 与蛋白质相互作用，从而发生“离子交换”效应。为了确认这些效应对 蛋白(5 mg/mL)、马肌红蛋白(2.5 mg/mL)以 测定的影响程度，我们需要对流动相条件进行评估。但是另一方面， 及维生素B12 (0.5 mg/mL)。所分析的小鼠 色谱分离的条件又会改变蛋