银杏抗氧化肽的分离纯化及活性鉴定 - 农业机械学报.pdf

２０１１年 ６月 农 业 机 械 学 报 第 ４２卷 第 ６期 银杏抗氧化肽的分离纯化及活性鉴定 贾韶千　吴彩娥　范龚健　李婷婷 （南京林业大学森林资源与环境学院，南京 ２１００３７） 　　【摘要】　为了分离制备银杏抗氧化肽，通过葡聚糖凝胶 ＳｅｐｈａｄｅｘＧ ２５、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ １０和半制备型液相色谱 对银杏抗氧化肽进行纯化，得到了具有抗氧化活性的肽段。纯化后的银杏抗氧化肽经过高效液相色谱鉴定为单一 组分，采用液相色谱串联四极杆飞行时间质谱测定其相对分子量为４５２２１Ｄａ。抗氧化试验结果表明，纯化后的银 杏抗氧化肽质量浓度为 １０ｍｇ／ｍＬ时，对羟自由基和 ＤＰＰＨ自由基具有很强的清除作用，清除率分别达到 ８０２６％ 和８３５７％。 关键词：银杏　抗氧化肽　分离纯化　飞行时间质谱 中图分类号：Ｓ６６４３；ＴＳ２０１２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００１２９８（２０１１）０６０１５２０４ ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＡｃｔｉｖｉｔｙＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＧｉｎｋｇｏＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔＰｅｐｔｉｄｅ ＪｉａＳｈａｏｑｉａｎ　ＷｕＣａｉｅ　ＦａｎＧｏｎｇｊｉａｎ　ＬｉＴｉｎｇｔｉｎｇ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００３７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｓｅｐａｒａｔｅａｎｄｐｒｅｐａｒｅｇｉｎｋｇｏａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐｅｐｔｉｄｅ，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ ２５ｇｅｌｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ １０ｇｅｌｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｒｅｖｅｒｓｅｐｈａｓｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰＨＰＬＣ）ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｐｕｒｉｆｙｇｉｎｋｇｏｐｅｐｔｉｄｅ．Ｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｔｈｅｇｉｎｋｇｏｐｅｐｔｉｄｅ ｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＨＰＬＣ．Ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｑｕａｄｒｕｐｏｌｅｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｗａｓ４５２２１Ｄａ．Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎｔｅｓｔｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｇｉｎｋｇｏａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐｅｐｔｉｄｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄｓｔｒｏｎｇｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙｔｏｈｙｄｒｏｘｙｌｒａｄｉｃａｌｓａｎｄＤＰＰＨｒａｄｉｃａｌｓｗｉｔｈｔｈｅｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｒａｔｅｓ ｒｅａｃｈｅｄｔｏ８０２６％ ａｎｄ８３５７％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｇｉｎｋｇｏ，Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐｅｐｔｉｄｅ，Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ 因此多肽的分离纯化就显得非常重要。本研究采用 　　引言 ２７０９碱性蛋白酶和胃蛋白酶分步水解银杏种仁蛋 银杏种仁（俗称白果）中蛋白质含量丰富，具有 白制备银杏抗氧化肽。银杏抗氧化肽粗品经过 ［１～２］ ［３～４］ ［５］ ［６］ 抗氧化 、抑菌 、抗肿瘤 、抗衰老 和免疫 ＳｅｐｈａｄｅｘＧ ２５和 ＳｅｐｈａｄｅｘＧ １０初步分离纯化， 调节［７～８］等多种功能作用。银杏种仁蛋白经过酶解 然后通过半制备型液相色谱进行纯化，得到单一的 可以制得活性多肽，使其抗氧化活性得到明显提高。 抗氧化肽组分，为进一步进行结构鉴定奠定基础。 前人对银杏抗氧化肽的研究主要集中在制备和活性