群体感应信号分子降解基因对铜绿假单胞菌毒力和生物膜形成的影响.pdf

中国科学 C 辑:生命科学 2007 年 第37 卷 第2 期: 234~240 SCIENCE IN CHINA PRESS 群体感应信号分子降解基因对铜绿假单胞菌毒力 和生物膜形成的影响 ①† ①②† ①② ①② ① ①* 王 瑶 戴 岳 张 勇 胡杨波 杨宝玉 陈士云 (① 中国科学院武汉病毒研究所, 武汉 430071; ② 中国科学院研究生院, 北京 100049) 摘要 来源于苏云金芽孢杆菌的aiiA 基因克隆至Pseudomonas/E. coli 穿梭载体并转入铜绿假单 胞菌PAO1 菌株, Western 杂交显示AiiA 蛋白在PAO1 中正确表达. IPTG 诱导9 和21 h 后分别取 样检测两种信号分子的含量, 表达aiiA 基因的菌株信号分子被完全降解; 检测重要的毒力因子弹 性蛋白酶和绿脓菌素, 表达 aiiA 基因的菌株中毒力因子的含量明显少于野生型对照和空载体对 照; 与运动性相关的丛集运动测定也表明, aiiA 基因影响了细菌的丛集运动. 进一步通过液体和 固体表面形成生物膜的差异以及对生物膜结构的扫描电子显微镜观察, aiiA 基因的表达对铜绿假 单胞菌生物膜的形成有重要影响. 关键词 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, Pa) aiiA 基因 毒力因子 生物膜 群体感应 细菌生物膜是细菌在固体表面形成的, 由胞外 浓度随着细菌群体密度达到一定阈值时, 启动特异 多糖包被的高度结构化的膜状复合物. 细菌生物膜 性基因表达 [2]. 目前已知QS能够调控细菌的多种重 作为细菌在自然界的主要存在形式, 危害人类的正 要功能如生物发光、生物膜形成、致病因子的产生 常生命活动 [1]: 至少 80%的细菌感染与生物膜有关; 等 [3]. 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa , Pa)是 当细菌形成生物膜后对抗生素的抗性提高 10~1000 人类三大条件性致病菌之一, 可引起呼吸道感染、败 倍, 是造成当前细菌耐药性的罪魁祸首之一; 对抗机 血症、骨髓炎、心内膜炎和尿路感染等疾病, 随着各 体免疫, 导致严重的临床问题; 在广泛使用的体内人 种侵入性检查和体内人工置留物的广泛使用, 极易 工医疗装置(如隐型眼镜、人工关节和心脏人工瓣膜) 聚集形成生物膜, 成为耐药菌株, 治疗十分棘手. Pa 表面形成生物膜而引起持续感染. 特别是细菌生物 是目前研究QS系统和生物膜的模式菌株, 其QS系统 膜的形成可使细菌逃逸抗菌药物和机体免疫系统的 由一个复杂的级联系统组成 [2], 两个信号系统 作用, 使多种细菌产生耐药, 而抗生素的大量使用又 (LasI/LasR, RhlI/ RhlR)分别产生特征性的N-酰基高 加剧了本已严重的细菌耐药性问题, 已成为临床治 丝氨酸内酯(AHL)信号分子N-丁酰基-L-高丝氨酸内 疗细菌感染疾病亟待解决的问题. 酯 BHL 和 N-(3- 氧 代 十 二 酰 )-L- 高 丝 氨 酸 内 酯 群体感应(guorum sensing, QS)是一种细菌细胞 OdDHL[4]. DNA芯片分析表明, 在Pa基因组中, 300 多 间信息传递机制, 即细菌通过合成、分泌自诱导分子 个基因受QS调控 [5], 其中