精氨酸修饰fgf21 及修饰后蛋白体内稳定性和糖代谢调节作用的研究.pdf

发布日期：2012-07-06 /cn/ch/common/create_pdf.aspx?file_nolag=1 生物化学与 物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 精氨酸修饰FGF21 及修饰后蛋白体内稳定性和糖代 谢调节作用的研究*# 1) 1) 1) 1) 1) 1) 1) 2) 1)** 昆 张雅坤 叶贤龙 王文飞 陈 睿 刘铭瑶 冯明芳 许嘉玲 李德山 1 ）东北农业大学生命科学学院生物制药教研室，哈尔滨 150030 ） 2 ）布里斯托医学与兽医学学院，布里斯托 B S28DZ ） 摘要 成纤维细胞 长因子21 （fibroblast growth factor21，FGF21 ）是2000 年发现的一个不依赖胰岛素调节血糖的细胞因子， 有望成为治疗糖尿病的侯选药物.但是，野生型FGF21 由于半衰期较短，在体内不稳定，从而影响了它的成药性.为提高FGF21 的稳定性，本实验在FGF21 的C 末端添加了2 个精氨酸（Arginine, Arg ），命名为FGF21-2A，用Compute pI/Mw软件计算之 后，等电点（isoelectric point, PI ）从5.43 上升到5.84，随后进 了蛋白的表达、分离纯化、体内稳定性及糖代谢调节作用的 研究.诱导表达后菌液的SDS胶图经BandScan5.0 分析后显示FGF21-2A 的表达量相对于野生型FGF21 提高了 10.6%. 家兔体内半衰期检测实验结果显示FGF21-2A 的半衰期显著延长.GOD-POD 法检测HepG2 肝癌细胞葡萄糖吸收实验、糖尿病 小鼠降血糖实验和肝糖原检测实验的结果证明，FGF21-2A 的降糖效果得到了增强，并且持续时间相对于野生型FGF21 显著 延长.Real Time PCR 结果发现，长期注射FGF21-2A 显著提高调了糖尿病小鼠肝脏内葡萄糖转运蛋白 （GLUT ）1 和葡萄糖激 酶 （GK ）的mRNA 的表达量，降低了葡萄糖-6-磷酸酶 （G6P）的mRNA 表达量，表明FGF21-2A 调节糖代谢的机制与野 型FGF21 一致.综上所述，精氨酸修饰FGF21 后增加了蛋白质的稳定性，进而增加了FGF21 对血糖的调控效果，为糖尿病药 物的发展做出了贡献. 关键词 FGF21-2A，精氨酸，稳定性，生物活性 学科分类号 R963，Q816 ___________________________ *黑龙江省科技厅重点攻关项目 （ 号：2006G0461-00 #东北农业大学博士启动基金项目 （合同 号：2010RCB52 ） ** 联系人：电话：0451，E-mail: deshanli@163.com 收稿日期：20 12-03-08 接受日期：2012-06-29 - 2 - 生物化学与 物物理进展 Prog. Biochem. Biophys. [1] 成纤维细胞生长因子-21 （FGF21 ）是成纤维细胞 长因子家族的一名新成员，主要在肝脏中表达 .在 [15] β-Klotho 的参与下 ，FGF21 在体外能够促进3T3-L1 脂肪细胞和人原代脂肪细胞吸收葡萄糖，增强胰岛 细胞功能.动物实验中，FGF21 能够降低血糖、降低甘油三酯 （TG ）、升高高密度胆固醇脂蛋白 （HDL ）、 降低低密度胆固醇脂蛋白 （LDL ），减少肝脏和血管的脂肪蓄积等效应，并且不会产 低血糖、体重增加 及水肿等常规降糖药物所带来的副作用[3,4, 13,18].FGF21 安全、可靠、不依赖胰岛素调节血糖的特点，使其有 [