整合素β3 亚基不同片段在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因激活 .pdf

学报 5 84 Journal of Ch na Pharmaceut cal Un vers ty 　2005, 36(6):584 -589 β3 杨建波, 姚　佳, 杨　洁 (, 210093) 【　】　:为建立用于筛选人血小板整合素蛋白αⅡbβ3 拮抗剂的高通量药物筛选模型, 对其β3 亚基 同片段在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因的激活作用进行初步研究。 :通过PCR 扩增得到6 个 同长度的整合素β3 亚基基因片段, 包括片段A1(55E-199Q)、A2(235K-385S)、A3(4 Ⅰ-454T)、A4(4 Ⅰ-77S)、A5(4 Ⅰ- 147S)和A6(4 Ⅰ-284S), 分别克隆到酵母双杂交诱饵载体pAS2-1 中, 然后将重组质粒导入酵母双杂交菌株Y 190 中, 检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因的激活作用。 :6 个片段对酵母均无毒性作用, 片段A 1、A2 、 A3、A5、A6 能激活报告基因HIS3 和 LacZ 的表达, 而片段A4 和 一个A3 的缺失突变体可以激活报告基因的表 达,β3 亚基N 末端存在 一个转录激活区。 :在建立模型时可以使用 A1、A2、A3 片段, 但转录激活是否是β3 亚基的生理功能仍有待进一步研究确证。 【】　整合素αⅡbβ3;酵母双杂交;转录激活 【】　Q786 　　【】　A 　　【】　1000-5048(2005)06-0584-06 　　αⅡbβ3 , , [3, 4] 。 , [5] N 。 , , β3 , [1, 2] [6] 。 109D-171E RGD , 274H-368L γ C [7] αⅡbβ3 。 (HHLGGAKQAGDV ) 。β3 , , 。, , 。 GAL4 , DNA ,, (DNA b nd ng doma n, GAL4-DBD ) A1(55E-199Q)RGD ,A2(235K-385S) (act vat on doma n, GAL4-AD )。 。β3 (PDB code:1M 1X , 。 1L5G), A3(4Ⅰ-454T ), , βA (109D-352R)hybr d [8, 9] , ,