辣椒脉斑驳病毒cp基因的原核表达及其抗血清的制备 - 园艺学报.pdf

园 艺 学 报 2010 ，37 （10）：1598 –1604 Acta Horticulturae Sinica 辣椒脉斑驳病毒CP 基因的原核表达及其抗血清 的制备 1,2 1,2 1 1 1,2 1,* 吴育鹏 ，王健华 ，冯团诚 ，张雨良 ，王小明 ，刘志昕 1 2 （中国热带农业科学院热带生物技术研究所，农业部热带作物生物技术重点开放实验室，海口 571101 ； 海南大学 环境与植物保护学院，海南儋州 570228 ） 摘 要：采用 RT-PCR 方法克隆了辣椒脉斑驳病毒文昌分离物（ChiVMV-WC ）的 CP 基因，并将其 连接到原核表达载体 pET-30b （+ ）上，克隆测序以确定其阅读编码框的正确性，然后将获得的重组质粒 pET30b-ChiVMV CP 转化大肠杆菌 Rosetta （DE3 ）后，用IPTG 进行诱导表达。SDS分析结果表明， CP 基因在大肠杆菌中获得了高效表达，获得的融合蛋白分子量约为 38 kD 。用Ni2+-NTA 琼脂糖亲和层析 纯化的融合蛋白免疫兔子并获得抗血清。Western blot 检测结果表明，抗血清与诱导表达的 ChiVMV-WC 6 。通过对田间 编码 CP 蛋白发生特异性反应。间接酶联免疫吸附法（ID-ELISA ）检测抗血清效价为 1/10 20 个样品的 ID-ELISA 检测，证实了所制备的抗血清与 ChiVMV 病叶具有良好的反应特异性。 关键词：辣椒；辣椒脉斑驳病毒；外壳蛋白；原核表达；抗血清 中图分类号：S 641.3 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2010 ）10-1598-07 Expression of Chilli veinal mottle virus Coat Protein and Preparation of a Virus-specific Antiserum 1,2 1,2 1 1 1,2 WU Yu-peng ，WANG Jian-hua ，FENG Tuan-cheng ，ZHANG Yu-liang ，WANG Xiao-ming ，and LIU Zhi-xin1,* 1 （Key Laboratory of Tropical Crop Biotechnology of Ministry of Agriculture ，Institute of Tropical Bioscience and 2 Biotechnology ，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Haikou 571101 ，China；College of Environment and Plant Protection ，Hainan University ，Danzhou ，Hainan 570228，China） Abstract ：The coat protein （CP ）gene of Chilli veinal mottle virus Wenchang isolate （ChiVMV-WC ） was amplified by RT-PCR ，and clone