海地瓜蛋白水解物中ace 抑制肽的分离纯化及合成 - chemical journal .pdf

Vol.33 高等 学校 化 学 学报 No.2 2012年2月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 308~312 海海地瓜蛋白水解物中ACE抑制肽的 分离纯化及合成 1 1 2 1 1 1 赵元晖 ,李八方 ,马敬军 ,董士远 ,刘尊英 ,曾名湧 (1. 中国海洋大学食品科学与工程学院,青岛266003;2. 中国检验认证集团山东有限公司,青岛266071) 摘要摇 采用Sephadex G鄄25凝胶柱层析、SP Sephadex C鄄25 阳离子交换层析和反相高效液相色谱等方法对海 地瓜水解产物进行分离纯化,得到了一种新的强活性ACE抑制肽,其氨基酸序列为MEGAQEAQGD,IC 值 50 为15郾9 滋mol/ L. 采用逐步缩合和片段缩合的方法对该抑制肽进行了设计合成. 合成肽的纯度为99郾72%, 分子量与序列结构均与理论值相符. 研究发现,抑制肽与胃蛋白酶和糜蛋白酶水解反应后,活性增强了3郾5 倍. 动物实验结果表明,剂量为3 滋mol/ kg 的抑制肽对大鼠自发性高血压具有明显的降压效果. 关键词摇 海地瓜;ACE抑制肽;分离纯化 中图分类号摇 O629郾72 摇 摇 摇 摇 文献标识码摇 A摇 摇 摇 摇 DOI:10.3969/ j.issn.0251鄄0790.2012.02.017 海地瓜(Acaudina molpadioides Semper)俗称香参,也称为海茄子,盛产于亚热带沙质海区,在日 本、菲律宾、印度尼西亚及我国山东到海南岛的海域均有分布,资源丰富. 海地瓜含有丰富的氨基酸 和有益于人体的多种微量元素及维生素,这为进一步开发利用海地瓜资源提供了一定的科学依据. 目 前,我国的高血压病发病率呈逐年上升趋势,已成为仅次于肿瘤的第二大疾病,不仅严重威胁人们的 生命安全,而且严重影响我国社会经济的发展. 这就要求人们不仅要有高效的治疗药物,还要从预防 [1,2] [3~5] 高血压做起 . 目前已有不少有关酶解食物蛋白制备具有ACE抑制活性肽的研究报道 . 来自于 纯天然食物蛋白质的ACE抑制肽对正常血压无影响并且安全可靠[6~8]. 本文利用凝胶柱层析、 阳离子 交换层析、反相高效液相色谱等纯化技术从海地瓜蛋白酶解物中分离出具有高活性的ACE抑制肽,应 用纳升电喷雾鄄四极杆鄄飞行时间串联质谱(Nano鄄ESI鄄Ms/ Ms)技术,对活性肽进行结构鉴定,并采用逐 步缩合和片段缩合相结合的方法对该肽进行了设计合成. 这不仅可以提高海地瓜的综合利用价值,还 可以通过对降压机理及肽结构的深入研究为提取或合成高血压治疗药物提供实验基础. 1摇 实验部分 1.1摇 试剂与仪器 海地瓜购于青岛市天桥综合超市,冷冻制品,湿重平均每只25 g,去除内脏洗净备用;雄性自发 性高血压大鼠(SHR,SPF),每只280~300 g,购于上海斯莱克斯实验动物有限公司;马尿酰鄄组氨酰鄄 亮氨酸、菠萝蛋白酶、ACE酶、 胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶为Sigma公司产品;Alcalase 2郾4L酶 (丹麦诺维信公司);SP Sephadex C鄄25 和Sephadex G鄄25(Phamacia公司);氨基酸Boc鄄Met鄄OH,Fmoc鄄 Glu(OtBu)鄄OH,Boc鄄Gly鄄OH,H鄄Ala鄄OBzl ·ToSH,Fmoc鄄Gln(Trt)鄄OH和H鄄Asp(OBzl) ·ToSH,缩合剂 2 DCC,EDC,HOAt和HOBt 以及缚酸剂NMM均购自上海吉尔生化公司