苹果花粉中与花柱s-rnase互作的γ–硫堇筛选及鉴定 - oalib.pdf

园 艺 学 报 2011 ，38 （8 ）：1437 –1446 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 苹果花粉中与花柱S-RNase 互作的γ–硫堇筛选 及鉴定 孙会玲，孟 冬，白松龄，胡建芳，李天忠* （中国农业大学农学与生物技术学院果树细胞与分子育种实验室，北京 100193 ） 摘 要：以‘国光’苹果（S S ）花粉为材料，成功构建了酵母pGADT7-cDNA 文库，转化效率约为 1 2 6 · μg-1 ，插入片段大小在 300 ~ 2 000 bp 之间。通过酵母双杂交方法，用苹果 S -RNase 的 C2HVC3 1.2 × 10 2 区筛选文库获得一个长 505 bp 的 cDNA 片段，经分析发现该 cDNA 序列上有一个 261 bp 的开放阅读框 （ORF ），该 ORF 编码一个具 N 端信号肽的多肽，该成熟多肽由 64 个氨基酸组成，富含带正电荷的赖氨 酸和精氨酸，其 C 端有 8 个半胱氨酸和一个 γ–硫堇功能域，结构预测显示其具有一个α螺旋，3 个β 折 叠，4 个二硫键，由此，推断其为苹果 γ–硫堇，命名为MdD1 。RT-PCR 分析发现：MdD1 基因在‘国光’ 苹果叶片、萼片、花瓣、子房、花药和花柱等组织中都有表达，但花药中表达量最高。酵母双杂交结果 表明 MdD1 除了与苹果 S -RNase 的 C2HVC3 区互作外，还与 S -RNase 的 C2HVC3 区，S 、S -RNase 的 2 1 1 2 成熟多肽区存在互作。初步认为：苹果 γ–硫堇可能通过与S-RNase 非特异性互作，作为花粉非 S 因子参 与自交不亲和反应。 关键词：苹果；S-RNase；自交不亲和；花粉cDNA 文库；酵母双杂交；γ–硫堇 中图分类号：S 661.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2011 ）08-1437-10 Screen and Identification of Pollen γ-thionin Interacting with Style S-RNase in Apple * SUN Hui-ling，MENG Dong ，BAI Song-ling ，HU Jian-fang ，and LI Tian-zhong （Laboratory of Fruit Cell and Molecular Breeding ，College of Agriculture and Biotechnology，China Agricultural University，Beijing 100193 ，China ） Abstract ：Yeast pGADT7-cDNA library was successfully constructed for apple ‘Ralls Janet ’pollen ， 6 -1 with a transformation efficiency up to 1.2 × 10 · μg and being inserted by sequences of 300 –2 000 bp in size.