水稻osε－cop1 基因的原核表达及多克隆抗体制备prokaryotic .pdf

基因组学与应用生物学，2013 年，第32 卷，第4 期，第497-502 页 Genomics and Applied Biology, 2013, Vol.32, No.4, 497-502 研究报告 Research Report 水稻 - 基因的原核表达及多克隆抗体制备 Osε cop1 1 2 3* 杨加伟 周玲艳 庄楚雄 1 遵义医学院生物化学教研室, 遵义, 563003; 2 仲恺农业工程学院生命科学学院, 广州, 510225; 3 华南农业大学生命科学学院, 广州, 510642 * 通讯作者, zhuangcx@scau.edu.cn 摘 要 ε-COP 蛋白是真核生物分泌途径中COP Ⅰ有被小泡的一个亚基。本研究利用PCR 技术扩增水稻 - 基因( - ) 的ORF(开放阅读框) ，并克隆到原核表达载体pET-23d 上，将表达载体pET-Os -cop1 ε cop Osε cop1 ε 转入大肠杆菌BL21 (DE3) ，以1.0 mmol/L 的IPTG (isopropyl β-D-thiogalactoside)诱导表达重组蛋白，然后以 重组蛋白作为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体。SDS电泳分析结果表明，成功诱导表达了分子量约为 35 kD 的重组蛋白，Western blot 检测表明，免疫家兔的抗血清与水稻幼穗总蛋白杂交信号较好。Os -COP1 ε 抗体的制备有助于研究该基因及COPI 小泡在水稻中的功能。 关键词 - 水稻, 原核表达, 抗体 Osε cop1 Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of - in Osε cop1 Rice (Oryza sativa L.) Yang Jiawei 1 Zhou Lingyan 2 Zhuang Chuxiong 3* 1 Department of Biochemistry, Zunyi Medical College, Zunyi, 563003; 2 College of Life Sciences, Zhongkai University of Agriculture and Engineer- ing, Guangzhou, 510225; 3 College of Life Sciences, South China Agricultural University, Guangzhou, 510642 * Corresponding author, zhuangcx@scau.edu.cn DOI: 10.3969/gab.032.000497 Abstract The ε-COP is one of the subunits of COP Ⅰvesicle in secret pathway of eukaryotic cells. The ORF (open reading frame) of - gene in rice ( - ) was obtained by PCR and cloned into the prokaryotic expres- ε cop Osε cop1 sion vector pET-23d. The resulting plasmid was then introduced into E. coli strain BL21 (DE3) and induced to ex- press the recombinant Osε-COP1 protein by 1.0 mmol/L isopropyl β-D-thi